IL-17A通过p38MAPK通路抑制巨噬细胞ABCA1蛋白的降解 .pdfVIP

IL-17A通过p38MAPK通路抑制巨噬细胞ABCA1蛋白的

降解

马望歌;周栋;王丽君;刘艳;陈小莉;郭宁;周娟

【期刊名称】《《西安交通大学学报（医学版）》》

【年(卷),期】2019(040)006

【总页数】4页(P853-856)

【关键词】白介素-17A;巨噬细胞;三磷酸腺苷结合盒转运体A1;泛素化

【作者】马望歌;周栋;王丽君;刘艳;陈小莉;郭宁;周娟

【作者单位】西安交通大学第一附属医院心血管内科陕西西安710061;陕西省分

子心脏病学重点实验室陕西西安710061;汉中市中心医院心血管内科陕西汉中

723000

【正文语种】中文

【中图分类】R543.5

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统相关疾病发病机制研究的重点和

热点。AS的发生与机体脂质代谢紊乱、炎症反应及局部自由基增加等因素有关，

其中免疫炎症机制在AS发生发展中的作用越来越被研究者认可[1]。当机体动脉

内膜受到损伤时，损伤部位的内皮细胞、粘附的血细胞可以释放粘附分子，进而诱

导血液中的单核细胞进入动脉内膜，并转化为巨噬细胞[2]。巨噬细胞通过膜表面

的清道夫受体可以大量摄取氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensity

lipoprotein,ox-LDL)。正常情况下，这些被摄取进巨噬细胞的ox-LDL经进一步

转化而排出。但当巨噬细胞对胆固醇的摄取、酯化和排出的动态平衡被打破时，脂

质将大量在胞内积聚，并进一步形成巨噬细胞源性的泡沫细胞，这是AS形成的初

始步骤[3]。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(adenosinetriphosphatebinding

cassettetransporterA1,ABCA1)可介导细胞内脂质的流出及稳态维持，其主要

通过促进胆固醇及磷脂从细胞内转运至胞外贫脂的载脂蛋白A-I(apolipoprotein

A-I,ApoA-I)，并形成前-β高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL)，从而

减少胞内脂质的蓄积，是机体抗AS的重要分子之一[4]。

白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)是体内一种重要的细胞因子，在炎症、肿瘤、

自身免疫性疾病等的发病进程中均发挥重要作用[5-6]。IL-17家族由IL-17A、IL-

17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E等6个成员构成，IL-17A是其中最为重要的成分。

有研究显示，AS斑块局部的IL-17表达上升[7]。但有关IL-17在AS病程中的确

切作用目前仍无定论[8]。本课题组前期研究结果提示，IL-17A可上调巨噬细胞

ABCA1蛋白的表达，在一定程度说明其抗AS作用。本研究将进一步探讨IL-17A

上调巨噬细胞ABCA1蛋白表达的相关分子机制。

1材料与方法

1.1主要试剂Raw264.7细胞购买于中国科学院上海细胞库，DMEM培养基购自

美国Hyclone公司，胎牛血清购自美国Gibco公司，放线菌酮购自美国Sigma

公司，ABCA1抗体购自美国Novus公司，p-p38MAPK、泛素(ubiquitin)及β-

actin抗体均购自美国CellSignalingTechnology公司，ProteinA/GPLUS-

Agarose和SB203580购自美国SantaCruz公司，其他试剂均为国产分析纯。

1.2细胞培养及分组Raw264.7细胞常规培养于100mL/L胎牛血清的DMEM培

养基中，50mL/LCO2、37℃孵箱培养。1～2d换液，待细胞长满后，2.5g/L

胰酶消化，1∶5传代。取生长状态良好的细胞种植于6孔培养板中。

干预前用无血清培养基培养细胞14～16h。用10、20、50ng/mLIL-17A干预，

确定最适浓度，进行后续实验。即与10μg/mL蛋白酶抑制剂放线菌酮

(cycloheximide,CHX)同时加入无血清培养基中，分别干预Raw264