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4种血清型登革病毒多表位重组抗原的表达及血清学初步评价

易方浩;郑碧英;徐军发;张俊爱;黎四平;贾岩;陈晨;余诗炎;王鑫;代友超;庄泽岗

【摘要】目的在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白

1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价.方法将B细胞抗原

表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头,串联合成1条全新的多表位融合

重组基因rE,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后

经IPTG诱导表达融合蛋白,用镍柱对重组蛋白纯化,并用SDS和Western

blot方法鉴定表达产物.以融合蛋白为抗原,用间接ELISA检测登革热病人血清IgM

抗体.结果重组表达载体pET28a-rE构建成功,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表

达.融合蛋白主要以包涵体形式存在,用镍柱纯化获得高纯度的目的蛋白,SDS

和Westernblot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符,建立的间接ELISA

具有较高的准确性.结论原核表达的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清学检

测价值.%WeexpressedBcellepitopesofdenguevirusenvelopeprotein

andNS1proteininprokaryoticcells,andpurifiedandevaluatedforits

serologicalactivities.Arecombinantmulti-epitopechimericgenenamedrE

includingeightBcellepitopeswasconnectedbylinkerpeptide(EAAAK)2

andclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET-28a(+),andtransformed

intoE.coliBL21(DE3)cellsforexpressionunderinductionofIPTG.The

expressedrecombinantproteinwaspurifiedwith6×Hispurification

media,andidentifiedbySDSandWesternblot,anditsantigenicity

wasanalyzedbyusinganindirectELISAassay.Therecombinantexpression

vectorpET28a-rEwasconstructedandexpressedinBL21(DE3)

successfully,buttherecombinantproteinsmainlyappearedasinclusion

bodies.Thetargetproteinwasobtainedwithhighpuritythroughthe

purificationofaffinitychromatography.SDSandWesternblot

analysisshowedthatthemolecularweightoffusionproteinwasinthe

expectedline.TheestablishedindirectELISAhashighaccuracy.This

recombinantpeptideantigenexpressedinE.colihasgoodpotentialfor

serumtesting.

【期刊名称】《中国人兽共患病学报》

【年(卷),期】2017(033)001

【总页数】6页(P32-37)

【关键词】登革病毒;抗原蛋白;原核表达;血清学评价

【作者】易方浩;郑碧英;徐军发;张俊爱;黎四平;贾岩;陈晨;余诗炎;王鑫;代友超;庄泽

岗

【作者单位】广东医科大学检验医学研究所,东莞523808;广东医科大学检验医学

研究所,东莞523808;广东医科大学检验医学研究所,东莞523808;广东医科大学检

验医学研究所,东莞523808;东莞市第八人民医院,东莞523808;广东医科大学检验

医学研究所,东莞523808;广东医科大学检验医学研究所,东莞523808;广东医科大

学检验医学研究所,东莞523