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蛋白酶激活受体—1阻断剂对兔心肺复苏后脑损伤的保护作用

心脏骤停后综合征（post-cardiacarrestsyndrome，PCAS）是心肺复苏患者自

主循环恢复后出现的多器官功能障碍综合征，病死率高、预后差，主要原因是心

脏骤停后脑组织持续性损伤[1-2]。心脏骤停心肺复苏的本质是全身缺血-再灌注

损伤，脑组织对缺氧最敏感，因而最易损伤。心脏骤停后脑损伤虽然由缺血缺氧

直接引起，其损伤机制包括兴奋性中毒、钙离子平衡失调、自由基损伤和细胞死

亡信号通路活化[3]。但是心脏骤停后脑缺血导致的间接损伤未引起足够重视。

近来研究表明，脑缺血或出血时凝血酶可通过受体及非受体介导途径导致脑损

伤，其重要途径之一是通过蛋白酶激活受体-1（protease-activatedreceptor1，

PAR-1）活化加重神经元损伤，其损伤与N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDA受体）

有关。PAR-1激活可上调NMDA受体介导的兴奋性氨基酸毒性，从而导致细胞

凋亡[4]。此外，凝血酶活化PAR-1，引起脑组织炎症反应，亦是脑损伤的重要原

因。因此，阻断凝血酶激活PAR-1应该是防治脑损伤的有效途径。本研究应用

兔心脏骤停后综合征模型，探索应用蛋白酶激活受体-1的特异性阻断剂对心肺复

苏后脑损伤的影响。

1材料与方法

1.1实验动物与模型建立

本动物实验得到湖北医药学院动物实验伦理委员会的批准。日本大耳白兔

30只（湖北省实验动物研究中心提供）6月龄，雄性，体质量（2.43±0.23）kg，

随机（随机数字法）分为假手术组、心脏骤停后综合征（PCAS）组、PAR-1阻

断剂组，每组10只。兔心脏骤停复苏后综合征（PCAS）制备方法依据文献[5]

方法进行，简述如下。兔速眠新0.24mL/kg麻醉后固定，用24号留置针穿刺股

动脉，连接ZOLL全功能除颤监护起搏仪，进行心电监护。逆行气管插管，固定

气管导管。心率、呼吸、血压稳定5min后（以此作为实验计时点，即0时），

采集动物血液，-80℃储藏供检测用。除假手术组外，其余各组耳缘静脉静注司

可林1mg/kg，1min后夹闭气管导管至心搏骤停。心搏停止的标准：动脉血压

失去波动呈一条直线或平均动脉压lt;18mmHg作为心搏骤停的判断标准（1

mmHg=0.133kPa）。

心搏停止5min后进行心肺复苏，呼吸机辅助呼吸[频率35次/min，潮气量

15mL/kg，气道压力0～1cmH2O（1cmH2O=0.098kPa）]，同时胸外心脏按压，

频率180～220次/min;静注肾上腺素0.25mg/kg，每3min一次;5%的碳酸氢钠2

mL/kg，每30min一次，共4次;陆醒灵0.24mL/kg，肌注。复苏成功的标准：

心肺复苏持续10min，动物恢复自主循环（ROSC）持续10min以上为复苏成功，

否则为复苏失败。复苏成功动物脱机拔管，保持气道通畅。

1.2动物处理

PAR-1阻断剂组于复苏成功后15min，以PAR-1阻断剂耳缘静脉注射

SCH79797（25μg/kgi.v.，SantaCruz公司，美国），每日1次，共3次。假手

术组、PCAS组分别以等量生理盐水静脉注射。分别在72h处死兔，摘除脑海马

组织，迅速置-80℃备用。

1.3酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清NSE含量

兔于心搏骤停前及复苏后24、48、72h不同时间点采取股静脉血，检测血

清神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平（试剂盒购自美国RD公司，操作按试剂

盒说明书进行），以监测脑损伤情况。

1.4病理观察

取海马组织，制备石蜡切片，常规苏木精-伊红（HE）染色法染色，显微镜

下观察。

1.5原位末端标记法（TUNEL）分析脑细胞

凋亡情况

石蜡切片常规脱蜡至水，用蛋白酶K工作液孵育15min，滴加破膜工作液

10min，洗涤，取TUNEL试剂盒内适量试剂1（TdT）和试剂2（dUTP）按1∶

9混合，覆盖组织，37℃孵育60min。切片洗