胃癌细胞株BGC-823中miR-138-5p负性调控Sirt1基因的表达 .pdfVIP

胃癌细胞株BGC-823中miR-138-5p负性调控Sirt1基因

的表达

杨伟;张娜;金丽娟;摆茹;韩梅

【摘要】目的在胃癌细胞中筛选并鉴定靶向Sirt1基因的micorRNA.方法生物信

息学软件预测特异性靶向Sirt1基因3’端非编码区域(3′-UTR)的microRNA;分别

构建野生型和突变型与目的microRNA匹配的Sirt1基因3′-UTR序列双荧光素酶

报告基因载体;将miR-138-5p过表达质粒分别与野生型和突变型双荧光素酶报告

基因载体共转染入胃癌细胞株BGC-823中,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素

酶活性.miR-138-5p过表达质粒转染BGC-823细胞,荧光定量PCR检测转染细胞

miR-138-5p与Sirt1mRNA的表达,Westemblot检测SIRT1蛋白的表达.结果

生物信息学软件预测显示miR-138-5p为靶向调控Sirt1的候选microR-NA;成功

构建野生型和突变型Sirt1基因3′-UTR双荧光素酶报告基因载体;荧光素酶活性实

验表明,miR-138-5p可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧

光素酶.miR-138-5p过表达质粒转染后的BGC-823细胞中,miR-138-5p表达显

著上调,Sirt1基因mRNA和蛋白的表达水平明显下调.结论在胃癌细胞中miR-

138-5p靶向作用于Sirt1基因3′-UTR,并负性调控Sirt1基因.

【期刊名称】《宁夏医科大学学报》

【年(卷),期】2016(038)009

【总页数】7页(P980-984,993,封4)

【关键词】microRNA-138-5p;Sirt1;负性调控;人胃癌BGC-823细胞系

【作者】杨伟;张娜;金丽娟;摆茹;韩梅

【作者单位】宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系,银川750004;

宁夏回族自治区第三人民医院,银川750021;宁夏回族自治区第三人民医院,银川

750021;宁夏回族自治区第三人民医院,银川750021;宁夏医科大学基础医学院病

原生物学与医学免疫学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医

学免疫学系,银川750004

【正文语种】中文

【中图分类】R735.2

沉默信息调节因子1（silentinformationregulator1，Sirt1）作为一种依赖于

烟碱腺嘌呤二核苷酸（nicotine-amidadeninedinucleotide，NAD）的去乙酰

化酶（histonedeacetylase，HDAC）广泛存在于哺乳动物细胞质和细胞核中。

Sirt1及其同源基因在细胞的生存、凋亡、肿瘤的发生发展、代谢性疾病以及抗衰

老等方面起着十分重要的调节作用[1]。MicroRNA（miRNA）是一类广泛存在于

生物体内、长度在19～25nt之间、高度保守的非编码小RNA，通过与靶基因信

使RNA（messengerRNA，mRNA）特定区域不同程度的互补结合而引起后者

的降解或翻译抑制，从而在转录后水平调控基因表达。近年来研究表明，Sirt1基

因的表达也受到miRNA的调控[2]。为深入研究Sirt1基因在胃癌细胞中的表观遗

传学调控机制，我们构建了Sirt1基因3′-UTR的重组质粒，筛选并鉴定靶向Sirt1

的miRNA。

1.1材料

pcDNA3.1质粒、人胃癌细胞株BGC-823购自天津赛尔生物技术有限公司；

pmirGLO质粒、T4DNAligase、双荧光素酶检测系统试剂盒购自美国Promega

公司；限制性内切酶、dNTP、PCR产物回收试剂盒、质粒提取试剂盒、M-MLV

逆转录酶、SYBRGreenERTMqPCRSuperMix试剂盒购自日本TaKaRa公司