类弹性蛋白多肽-红色荧光蛋白融合蛋白的表达纯化及细胞相容性.pdfVIP

第22卷第1期北华大学学报(自然科学版)Vol.22No.1

2021年1月JOURNALOFBEIHUAUNIVERSITY(NaturalScience)Jan.2021

文章编号:1009-4822(2021)01-0042-05DOI:10.11713/j.issn.1009-4822.2021.01.008

类弹性蛋白多肽-红色荧光蛋白融合蛋白的

表达纯化及细胞相容性

刘宁,崔梅英,王明月,杨泽斌,王浩,毛禹,方楷漪,夏薇,关新刚

(北华大学医学技术学院,吉林吉林132013)

摘要:目的构建携带红色荧光蛋白(mCherry)标签的类弹性蛋白(ELP)原核表达载体,并表达纯化ELP-

mCherry融合蛋白,探讨ELP-mCherry融合蛋白与细胞的相容性.方法对利用限制性内切酶XbaI和XhoI对

mCherry质粒和pET28a-ELP载体同时进行双酶切,将酶切产物回收、连接并转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,构

建重组质粒pET28a-ELP-mCherry;将重组质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中,诱导表达ELP-

mCherry融合蛋白;利用可逆转变循环(ITC)法对ELP-mCherry融合蛋白进行纯化;通过MTT法探讨ELP-

mCherry融合蛋白与人胚肾上皮细胞HEK293T和小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的细胞相容性.结果DNA测序

结果显示成功构建了ELP-mCherry原核表达载体;利用BL21(DE3)大肠杆菌表达系统成功表达ELP-mCherry融合

蛋白,通过ITC法纯化得到了高纯度融合蛋白.MTT结果表明:在所有ELP-mCherry蛋白测试浓度下,HEK293T和

NIH3T3细胞存活率接近或超过100%.结论成功构建ELP-mCherry原核表达载体,成功表达并纯化得到高纯度

的ELP-mCherry融合蛋白,ELP-mCherry融合蛋白在HEK293T和NIH3T3细胞中具有良好的细胞相容性.

关键词:类弹性蛋白多肽;红色荧光蛋白;原核表达;蛋白纯化;细胞相容性

中图分类号:Q943.2文献标志码:A

ProkaryoticExpression,PurificationandCellCompatibilityof

ELP-mCherryFusionProtein

LIUNing,CUIMeiying,WANGMingyue,YANGZebin,WANGHao,

MAOYu,FANGKaiyi,XIAWei,GUANXingang

(SchoolofMedicalTechnology,BeihuaUniversity,Jilin132013,China)

Abstract:ObjectiveToconstructelastin-likeprotein(ELP)prokaryoticexpressionvectorwithred

protein(mCherry)tag,topurifytheELP-mCherryfusionproteinandinvestigatethebiocompatibilityofELP-

mCherryproteinoncells.MethodmCherryplasmidsandpET28a-ELPplasmidsweredoubledigestedby

restrictionendonucleasesXbaIandXhoI,whichwereusedtoconstructpET28a-ELP-mCherrypla