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膀胱癌YAP表达及YAP对膀胱癌干细胞特性的影响

杨勇;姜睿

【摘要】目的探究膀胱癌中yes相关蛋白(YAP)表达情况,并研究YAP对膀胱癌干

细胞特性的影响.方法使用Westernblot和qRT-PCR实验检测正常膀胱上皮细胞

及膀胱癌细胞YAP蛋白及mRNA表达情况;应用慢病毒过表达T24细胞YAP表达,

使用Westernblot和qRT-PCR实验检测膀胱癌细胞系干细胞标志物CD133、

Nanog和Oct-4变化;应用平板克隆实验检测膀胱癌克隆形成能力改变.结果膀胱

癌细胞相对正常膀胱上皮细胞YAP高表达(P0.05);成功构建YAP过表达膀胱癌

细胞系;YAP过表达膀胱癌细胞干细胞标志物CD133、Nanog和Oct-4表达上

调,YAP过表达后平板克隆体积增大、数量增多(P0.05),干细胞特性增强.结论

YAP在膀胱癌中高表达,且YAP高表达增强膀胱癌干细胞特性.

【期刊名称】《实用医学杂志》

【年(卷),期】2018(034)019

【总页数】4页(P3181-3184)

【关键词】膀胱癌;YAP;慢病毒;肿瘤干细胞

【作者】杨勇;姜睿

【作者单位】西南医科大学附属医院泌尿外科四川泸州646000;遂宁市第一人民

医院泌尿外科四川遂宁629000;西南医科大学附属医院泌尿外科四川泸州

646000

【正文语种】中文

膀胱癌（bladdercancer，BCa）是泌尿系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤，近年来发

病率和病死率都呈升高的趋势［1］。目前对浅表性膀胱癌多采取手术治疗的方式，

但膀胱癌具有易复发、侵袭转移等特点，导致膀胱癌的治疗仍然是难点［2］。近

年来膀胱癌干细胞的发现对于膀胱癌治疗提供新思路，靶向治疗膀胱癌干细胞对于

有效根治膀胱癌至关重要，积极寻找调节膀胱癌干细胞特性的蛋白分子仍是目前研

究热点。

Yes相关蛋白（YAP）是Hippo信号通路中的重要组成部分，在细胞内起到信号

转导和转录共激活的作用［3］。Hippo⁃YAP信号通路是众多调节膀胱癌信号通

路中一条重要的通路。YAP的异常表达与膀胱癌的发生发展、侵袭转移以及凋亡

转移密切相关［4］。此外，YAP蛋白可以促进肿瘤干细胞干性相关基因活化，表

明YAP在肿瘤干细胞中起到重要作用［5］，然而YAP与膀胱癌干细胞之间的关

系仍未报道。

本研究通过比较正常膀胱上皮细胞及膀胱癌细胞YAP蛋白及mRNA表达差异，

验证YAP在膀胱癌干细胞干性维持中的作用，为膀胱癌治疗提供新的思路。

1材料与方法

1.1材料人正常膀胱上皮细胞SVHUC⁃1和人膀胱癌细胞株T24、253J、5637购

自中国科学院昆明细胞库；DMEM培养基和RPMI1640培养基购自美国Gibco

公司；胎牛血清购自以色列BI公司；YAP过表达慢病毒购自上海吉凯基因化学技

术有限公司；CD133单克隆抗体购自美国SantaCruz公司，YAP抗体购自美国

CST公司，Nanog抗体和Oct⁃4抗体购自美国abcam公司，GAPDH抗体购自

沈阳万类生物科技有限公司。

1.2细胞培养和慢病毒转染细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM或RPMI1640

培养基（青霉素100IU/mL和链霉素100IU/mL），置于37℃、体积分数为5%

的CO2细胞培养箱中培养。2～3d更换培养基，待细胞生长贴满培养皿，使用

0.25%胰酶消化传代。T24细胞正常培养传代，YAP过表达慢病毒预实验感染确

定T24细胞病毒转染MOI值。细胞计数按照1.0×105/孔接种于6孔板中，转染

前用PBS清洗细胞，CompleteMdeium稀释polybrene至50μg/mL，细胞加

入polybrene和病毒，转染细胞48h后使用2～3μg/mL嘌呤霉素细胞筛选2～

3周，荧光显微镜下检测荧光蛋白表达，Westernblot和qRT⁃PCR检测YAP蛋

白和mRNA