3.1基因工程——DNA粗提取与鉴定课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

;一、实验原理：;构成染色体的核蛋白加速解聚，游离出DNA分子，并使DNA分子充分溶解于Nacl溶液中。;一、实验原理：;1.选择适宜的材料;1.选材：;红细胞;DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等;1.选材：;EDTA（乙二胺四乙酸）：是一种能与二价金属离子结合的螯合剂，而大多数核酸酶需要镁离子，因此可以作为DNA酶的抑制剂，防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。;1.选材：;2.破碎细胞;3.提取DNA(过滤或者离心）;DNA不溶于酒精，但有些蛋白质，脂质溶于酒精。

在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静置2-3min，溶液中会出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。;用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物晾干。;;二苯胺;了解—鉴定（定量）;分光光度计;入射光强度Io;1.标准曲线的绘制

取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂:

混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。

;2.样品测定

吸取DNA样液1ml,加入二苯胺溶液2.0ml，加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。;了解—鉴定(紫外吸收法）;纯DNA的A260/A280应大于等于1.8，样品中如含有杂蛋白，A260/A280即明显。

定量测定时，通常以A260值为1相当于50μg/ml双螺旋DNA，或40μg/ml单链DNA（或RNA）进行换算。;粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？;应用;应用;应用;香蕉中DNA的粗提取实验

①取一段长约2cm的去皮香蕉，剪碎置于玻璃杯中。

②加入10mL温水，2g食盐，5滴洗洁精，充分研磨。

③用双层纱布过滤研磨液，收集滤液。

④向滤液中加人2g嫩肉粉，混合均匀。

⑤将滤液置于55~60°C(木瓜蛋白酶作用的最适温度)的水浴中加热5~10min。

⑥冷却，加入等体积、预冷的体积分数为95%的酒精。

⑦静置2~3min,用玻璃棒(或筷子)挑取白色絮状析出物。

;