8 分子生物学研究法（下）.ppt

图6-38蛋白激酶体外磷酸化活性分析取开花后10天野生型及无纤维突变体总蛋白各10μg进行激酶活性反应：40mMHepes缓冲液（PH7.4），15mMMgCl2，2mMDTT,10μMATP和2μCiγ-32P-ATP并根据实验设计加入10μMSyntide2，100μMCa2+或50μMEGTA。室温下20分钟，吸取15μl反应液点在P81磷酸纤维素膜上，终止反应。用1%的磷酸洗膜5次，每次10分钟。洗后将膜晾干，压片观察。突变体野生型Syntide2Ca2+EGTA－+++－－++－－－+野生型棉花及无纤维突变体的CDPK（Ca2+dependentproteinkinase）激酶活性检测.先取10ug野生型及突变体蛋白进行SDS电泳（胶内含有HistoneH1蛋白作为激酶底物）。胶内蛋白通过变性、复性后，加入激酶反应液在室温反应1-3h后终止,干胶,压片观察。野生型棉花及无纤维突变体In-gel激酶活性检测。GhCDPK1GhACS2Ca2+dependentproteinkinaseGhCDPK1磷酸化

棉花乙烯合成酶GhACS2ThankYou!*表达序列标签从互补DNA(cDNA)分子所测得部分序列的短段DNA(通常300~500bp)。从cDNA文库所得到的许多表达序列标签集合组成表达序列标签数据库，代表在一定的发育时期或特定的环境条件下，特定的组织细胞基因表达的序列。可用于验证基因在特定组织中的表达，推导全长cDNA序列，或作为标签标志基因组中的特殊位点以确定基因的位置等。[1]?基因是生命遗传的基本单位，人类基因组由30亿个碱基对组成，蕴藏着生命的奥秘。人类基因组计划(humangenomeproject,HGP)是由美国科学家于1985年率先提出，于1990年正式启动的。美国、英国、法国、德国、日本和我国科学家共同参与了这一预算达30亿美元的人类基因组计划。被誉为生命科学的“登月”计划，原计划于2005年完成。各国所承担工作比例约为美国54%，英国33%，日本7%，法国2.8%，德国2.2%，中国1%。人类基因组计划的目的：测出人类基因组DNA的30亿个碱基对的序列，发现所有的人类基因，找出它们在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息。2000年6月，人类基因组“工作框架图”已完成，科学家发现人类基因数目约为2.5万个，远少于原先10万个基因的估计。其中的外显子，也就是能够制造蛋白质的编码序列，只占总长度的约1.5%。*二代测序/w_19rsd3nydd.html*P205图6-1*P205图6-1*蛋白质是行使细胞功能的主要承担者，蛋白质组是细胞功能和状态的最直接描述，转录组成为研究基因表达的主要手段。转录组是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的必然纽带，转录水平的调控是目前研究最多的，也是生物体最重要的调控方式。*Q5、UnigeneN50是什么意思？

A：UnigeneN50的大小是评判转录组组装效果的一个指标，将所有Unigene按照从长到短的顺序排列，然后从长到短依次相加，当加和达到Unigene库总长度的1/2时的那条Unigene长度为UnigeneN50的长度。?*产前检测、宫颈癌筛查等健康服务，无创的唐氏综合征检测，荧光原位杂交技术（Fluorescenceinsituhybridization，FISH）是一种重要的非放射性原位杂交技术*产前检测、宫颈癌筛查等健康服务，无创的唐氏综合征检测，*转录组测序能够全面快速地获得某一物种特定组织或器官在某一状态下的几乎所有转录本序列信息，已广泛应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。转录组学，是指一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科。转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。转录组是研究细胞表型和功能的一个重要手段。以DNA为模板合成RNA的转录过程是基因表达的第一步，也是基因表达调控的关键环节。所谓基因表达，是指基因携带的遗传信息转变为可辨别的表型的整个过程。与基因组不同的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不完全相同的。通常，同一种组织表达几乎相同的一套基因以区别于其他组织，如脑组织或心肌组织等分别只