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松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1的原核表达与
活性测定
作者：李煜吴小芹胡龙娇
来源：《南方农业学报》2020年第11期
摘要：【目的】純化获得松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1并验证其体外活性，为后续研究效
应蛋白Bx-FAR-1参与松材线虫侵染松树的分子机制打下基础。【方法】利用PCR技术从松材
线虫cDNA中扩增出效应基因Bx-FAR-1，用同源重组的方式将目的片段连接至原核表达载体
pET-32a（+）。通过原核表达系统诱导并纯化获得大量效应蛋白Bx-FAR-1，利用SDS-聚丙烯
酰氨凝胶电泳（SDS）和Westernblotting对纯化获得的蛋白进行鉴定，同时通过本氏烟
瞬时表达系统验证蛋白活性。【结果】从松材线虫cDNA中成功扩增出Bx-FAR-1基因
（BXY_1685000.1）;通过同源重组成功获得重组表达载体pET32a-BxFAR，并转化至大肠杆菌
BL21感受态细胞。当诱导条件为15℃下150r/min诱导16h时重组蛋白以可溶性形式表达，
且蛋白表达量高。效应蛋白Bx-FAR-1活性测定结果显示，当蛋白浓度达100nmol/L时，可抑
制致病疫霉的病原相关分子模式（PAMP）INF1引起的烟草细胞坏死。【结论】松材线虫效应
蛋白Bx-FAR-1可抑制寄主植物的免疫反应。
关键词：松材线虫;效应蛋白;原核表达;蛋白纯化
中图分类号：S763文献标志码：A文章编号：2095-1191（2020）11-2731-07
FAR-1
LIYu1，2，WUXiao-qin1，2*，HULong-jiao1，2
（1Co-innovationCenterforSustainableForestryinSouthernChina/CollegeofForestry，
NanjingForestryUniversity，Nanjing210037;2JiangsuKeyLaboratoryforPreventionand
ManagementofInvasiveSpecies，Nanjing210037）
Abstract：【Objective】ThispaperaimedtoobtainBursaphelenchusxylophiluseffectorprotein
Bx-FAR-1andverifyitsactivityinvitro，andprovideabasisforfurtherstudyontheroleofeffector
proteinBx-FAR-1inthepathogenesisofB.xylophilus.【Method】ThetargetgeneBx-FAR-1was
amplifiedfromB.xylophiluscDNAbyPCR.Thetargetgenewasinsertedintotheexpressionvector
pET-32a（+）byhomologousrecombination，andalargequantityofeffectorproteinBx-FAR-1
wasobtainedbyprokaryoticexpressionsystem.ThepurifiedproteinwasidentifiedbySDS-
polyacrylamidegelelectrophoresis（SDS）andWesternblotting，anditsactivitywas
verifiedbytransientexpressionsysteminNicotianabenthamiana.【Result】TheBx-FAR-1gene
（BXY_1685000.1）wassuccessfullyamplifiedbyPCRfromB.xylophiluscDNAandinsertedinto
theexpressionvectorpET-32abyhomologousrecombination.TherecombinantplasmidpET32a-
BxFARwastransformedintoEschrichiacoliBL
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