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探讨PD-1抑制剂在不同小鼠肿瘤模型中的应答差异

白杰;高志涛;石龙;底静;李嵩;李祥;聂晶;韩为东

【期刊名称】《《解放军医学院学报》》

【年(卷),期】2019(040)004

【总页数】7页(P357-363)

【关键词】免疫治疗;PD-1抑制剂;小鼠肿瘤模型

【作者】白杰;高志涛;石龙;底静;李嵩;李祥;聂晶;韩为东

【作者单位】[1]解放军总医院第一医学中心生物治疗病区/分子免疫室北京

100853;[2]解放军联勤保障部队第980医院河北石家庄050051

【正文语种】中文

【中图分类】R730.51

肿瘤基因突变的累积促进肿瘤生长，同时也增加了被免疫细胞识别的风险，然而在

肿瘤发生演变过程中，肿瘤细胞能够借助免疫抑制性细胞因子、趋化因子、调节性

免疫细胞及免疫检查点通路下调机体免疫功能等逃避免疫系统的监视，维持肿瘤的

免疫耐受[1-2]。随着肿瘤治疗研究的日益深入，抗肿瘤免疫调节及肿瘤免疫治疗

受到广泛关注，已成为重要的肿瘤治疗手段。肿瘤免疫抑制在有效的抗肿瘤免疫反

应中具有显著的阻碍作用，PD-1/PD-L1抑制剂等免疫检验点抗体药物能够激活效

应T淋巴细胞，阻断肿瘤免疫抑制机制，恢复肿瘤患者被抑制的免疫活性，从而

识别并杀死肿瘤细胞，为肿瘤免疫治疗提供了新思路和新方法[3-4]。截止2018

年12月，PD-1抑制剂，包括Pembrolizumab(Keytruda)、Nivolumab

(Opdivo)等已经批准用于10余种肿瘤的治疗，包括肺癌、恶性黑色素癌、肾癌、

霍奇金淋巴瘤、肝癌等，肿瘤客观缓解率及生存期均显著提升[5-6]。然而，PD-1

抑制剂也有其自身的局限性，其单药使用反应率一般在10%～40%之间，不是对

所有肿瘤类型有效，且即使在敏感型肿瘤中也只有部分人群能够获益[7]；同时越

来越多的临床研究发现PD-1抑制剂免疫治疗也存在继发耐药现象[8]。如何提高

PD-1抑制剂临床疗效，探索其作用机制与治疗抵抗机制从而精准预测临床反应性

是亟待解决的重要科学问题与临床难题；解决这些问题离不开探究性与验证性的动

物实验，本研究旨在对比几种常用小鼠肿瘤模型对PD-1抑制剂的反应性差异，并

初步探究其肿瘤浸润T淋巴细胞的表型及活性，为PD-1抑制剂相关研究提供参考。

材料与方法

1实验动物与细胞B16黑色素瘤、CT26结肠癌、MC38结肠癌细胞株均购于国家

实验细胞资源共享平台(北京总部)并保存在本实验室；BALB/c小鼠(雌性、6周龄、

体质量约20g)以及C57BL/6小鼠(雌性、6周龄、体质量约20g)均购于北京维

通利华实验动物技术有限公司。

2主要试剂与仪器PBS缓冲液，RMPI1640培养基，0.25%胰蛋白酶，胎牛血清

(美国Gibco公司)；流式细胞术抗体anti-CD3-PerCP、anti-CD8α-APC、anti-

IFN-γ-PE，anti-Ki67-FITC(美国BioLegend公司)；PD-1抑制剂anti-PD-1

mAb(美国Bioxcell公司)；小鼠肿瘤组织解离试剂盒，小鼠CD8+T细胞分选磁

珠(德国美天旎公司)；小鼠肿瘤组织淋巴细胞分离液(Solarbio公司)；BDFACS

Calibur流式细胞仪(美国BD公司)。

3小鼠肿瘤模型体外培养B16、CT26、MC38细胞并传代至适宜状态后制备细胞

悬液，于无菌条件下以PBS调整细胞浓度为2×106/ml，CT26肿瘤细胞悬液于

BALB/c小鼠背部皮下无菌接种，接种量为100μl，肿瘤细胞接种量为2×105/只；

MC38、B16肿瘤细胞悬液于C57BL/6小鼠背部皮下无菌接种，接种量为100μl，

肿瘤细胞接种量为2×105/只。每日观察荷瘤小鼠的生长情况。荷瘤第6天起隔日

测量瘤块体积，用游标卡尺测量瘤体的最长径和最短径。肿瘤体积=瘤体长径×瘤

体短径2/2；当肿瘤体积达到100mm3时，视为荷瘤成功，CT26荷瘤小鼠约10

d可成瘤，MC38、B16荷瘤小鼠约15d可成瘤。

4实验动物分组及处理当肿瘤体积达到100mm3后，CT26及B16荷瘤小鼠随

机