粮食及其制品中维生素B快速检测.docxVIP

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粮油检验粮食及其制品中维生素B快速检测

1范围

本文件规定了粮食及其制品中维生素B3（烟酸）、维生素B5（泛酸）、维生素B7（生物素）、维生素B9（叶酸）、维生素B12的快速检测方法。

本文件第一法适用于粮食及其制品中维生素B3（烟酸）的快速检测。

本文件第二法适用于粮食及其制品中维生素B5（泛酸）的快速检测。

本文件第三法适用于粮食及其制品中维生素B7（生物素）的快速检测。

本文件第四法适用于粮食及其制品中维生素B9（叶酸）的快速检测。

本文件第五法适用于粮食及其制品中强化维生素B12的快速检测，不适用于维生素B12总量的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

第一法粮食及其制品中维生素B3（烟酸）快速检测

4原理

样品经过提取和稀释后与维生素B3检测培养基一同加入包埋有植物乳植杆菌（Lactiplantibacillusplantarum）(ATCC8014)的微孔中。植物乳植杆菌生长状况取决于维生素B3的含量，直至培养液中的维生素B3被完全消耗。植物乳植杆菌的生长状况(浊度)与维生素B3含量呈现对应关系，经酶标仪进行吸光度值测定并拟合标准工作曲线，计算出试样中维生素B3含量。

5试剂和材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

5.1试剂

5.1.1无水乙醇（C2H5OH）。

5.1.2盐酸（HCl）。

5.1.3氢氧化钠（NaOH）。

5.1.4一水合柠檬酸（C6H8O7·H2O）。

5.1.5α-淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg。

5.2试剂配制

5.2.125%乙醇溶液（1+3）：量取250mL无水乙醇与750mL水混匀。

5.2.2盐酸溶液（1mol/L）：吸取8.3mL盐酸于100mL容量瓶中，加水定容，混合均匀。

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5.2.3盐酸溶液（0.1mol/L）：吸取1mol/L盐酸溶液10mL于100mL容量瓶中，加水定容，混合

均匀。

5.2.4氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4.00g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL，混合均匀。

5.2.5氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：称取0.40g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL，混合均匀。

5.2.6柠檬酸盐缓冲液（pH4.5）：将1.50g一水合柠檬酸加入100mL烧杯中，加入50mL水，边搅拌边溶解，加入1mol/L氢氧化钠溶液12mL（或0.48g氢氧化钠），使用0.1mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液，将pH值调至4.5，转移至100mL容量瓶中，用水定容，现用现配。

5.2.7无菌水：121℃高压灭菌15min。

5.3培养基

维生素B3(烟酸)测定用培养基：见附录A.1.4。

注：可使用商品化的合成培养基，按照说明书无菌操作，现用现配。

5.4标准品

维生素B3(烟酸)标准品（C6H5NO2，CAS号：59-67-6）：纯度≥99％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

5.5标准溶液配制

5.5.1维生素B3标准储备液(5mg/100mL)：准确称取50mg维生素B3标准品(精确至0.1mg)，用25%乙醇溶液溶解并转入到1000mL容量瓶中，定容至刻度，混匀。转移至棕色试剂瓶，于-18℃下避光保存，可保存6个月。

5.5.2维生素B3标准中间溶液(0.25mg/100mL)：准确吸取标准储备液5mL于100mL容量瓶中，加水定容至刻度。临用前配制。

5.5.3维生素B3标准使用工作液：吸取0μL、160μL、320μL、640μL、960μL、1600μL标准中间溶液于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，其浓度为0.0μg/100mL、0.4μg/100mL、0.8μg/100mL、1.6μg/100mL、2.4μg/100