粮油检验 粮食中T-2HT-2毒素的测定胶体金快速定量法.docxVIP

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粮油检验粮食中T-2/HT-2毒素的测定胶体金快速定量法

1范围

本文件规定了T-2/HT-2毒素总量的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、样品测定、结果描述和重复性。

本文件适用于小麦、玉米等粮食及其制品中T-2/HT-2毒素的快速定量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样提取液中T-2/HT-2毒素与检测条中的胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与试样中T-2/HT-2毒素含量相关。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出试样中T-2/HT-2毒素含量。

5试剂

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682中三级水的要求。5.1稀释缓冲液：由T-2/HT-2毒素胶体金检测条配套提供，或按照产品使用说明书配制。5.2试样提取液：70%（体积分数）甲醇溶液。

6仪器设备及材料

实验室常规仪器、设备及材料。

6.1粉碎机：可使试样粉碎后全部通过20目筛。

6.2天平：分度值0.01g。

6.3漩涡振荡器。

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6.4滤纸：采用Whatman2V（或等效）滤纸。

6.5移液器：100μL～1000μL、20μL～200μL。

6.6离心机：转速不低于4000r/min。

6.7ROSAT-2/HT-2毒素胶体金快速定量检测条1）：需冷藏储存，具体储存条件参照使用说明；技术要求见附录A。

6.8孵育器：可进行45℃恒温（控温精度±1℃)孵育。6.9读数仪：可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。

7样品制备

7.1扦样与分样

按照GB/T5491执行，在采样过程中，应防止样品污染，取代表性样品不少于500g。

7.2样品粉碎

用粉碎机（6.1）将待测样品粉碎至全部通过20目筛，充分混合均匀。

7.3样品处理

用天平（6.2）准确称取粉碎后的样品10.00g试样于100mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL试样提取液（5.2），密闭，用漩涡振荡器（6.3）剧烈振荡1min~2min。静置后用滤纸（6.4）过滤，或移取1.0mL~1.5mL（6.5）混合液于离心管中，用离心机（4000r/min）（6.6）离心1min。取滤液或离心后上清液100μL于另一离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液（5.1），充分混匀待测。

注：不同厂家的T-2/HT-2毒素胶体金快速定量检测条所用的样品处理方法可能不同，应按照产品使用说明的规定方法进行操作。

注：不同厂家孵育器和读数仪的使用方法可能不同，应按照产品使用说明的规定方法进行操作。

8样品测定

8.1将胶体金检测条（6.7）从冷藏状态（2℃~8℃)取出放置至室温。将孵育器（6.8）预热至45℃。将检测条（6.7）平放在孵育器（6.8）凹槽中，打开加样孔。

8.2准确移取300μL待测溶液（7.3），加入检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器（6.8）盖。

8.3孵育10min后，取出检测条（6.7）观察C线（质控线）和T线（检测线）的显色情况。若出现下述情况，视为无效检测。

1）C线不出现；

2）C线出现，但弥散或严重不均匀；

3）C线出现，但T1或T2线弥散或严重不均匀；

8.4选择读数仪（6.9）的T2检测频道，并设定为基质00（MATRIX00），开始样品测定，测定需在2min内完成，读数仪（6.9）自动显示样品中T-2/HT-2毒素的含量。

若读数仪显示“+250ppb”，需移取300μL待测溶液（7.3）于离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液混匀后，按照8.1～8.4进行测定，其中基质设定为01（MATRIX01）。

注：不同厂家孵育器和读数仪的使用方法可能不同，应按照产品使用说明的规定方法进行操作。

9结果表述

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试样中T-2和HT-2毒素总含量由读数仪自动计算并显示，单位为微克每千克(μg/kg）。方法检测限