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转化生长因子β1对人宫颈癌细胞上皮-间质转化的诱导作用

石玉荣;陈素莲;杨滢;王慧

【摘要】目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人宫颈癌HeLa细胞上皮-间质转

化(EMT)发生的诱导作用.方法用10ng/mL的TGF-β1处理HeLa细胞72h,电镜

下观察细胞形态,real-timePCR和Westernblotting检测EMT相关上皮标记分

子和间质标记分子的表达,划痕试验、Transwell实验检测细胞侵袭和转移能力.结

果TGF-β1可诱导HeLa细胞呈现EMT细胞形态,并且下调上皮相关标记蛋白E-

cadherin和β-catenin的表达,上调间质相关标记蛋白Vimentin和N-cadherin

的表达;细胞的侵袭和转移能力明显增强.结论TGF-β1能够诱导HeLa细胞发生

EMT,促进细胞侵袭和转移.

【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》

【年(卷),期】2015(035)004

【总页数】5页(P530-534)

【关键词】上皮-间质转化;转化生长因子β1;宫颈癌细胞;侵袭;转移

【作者】石玉荣;陈素莲;杨滢;王慧

【作者单位】蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室,蚌埠233000;蚌埠医学院

检验诊断学实验中心,蚌埠233000;蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室,蚌埠

233000;蚌埠医学院检验诊断学实验中心,蚌埠233000;蚌埠医学院生物化学与分

子生物学教研室,蚌埠233000;蚌埠医学院检验诊断学实验中心,蚌埠233000

【正文语种】中文

【中图分类】R730.2

宫颈癌是妇科易发恶性肿瘤。宫颈癌的主要特点是局部蔓延，早期的侵袭和转移往

往使患者错过了最佳的手术时机，而肿瘤化疗又容易产生多药耐药。上皮－间质转

化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)是指上皮细胞在一些因素作用下，

脱离上皮细胞间的黏附连接，获得浸润和游走迁移的能力，并具有间质细胞形态和

特性的过程。肿瘤细胞经过EMT，细胞获得了高侵袭性，使肿瘤细胞转化成恶性

程度更高的细胞表型。EMT不仅是细胞侵袭转移的前提，同时亦被认为是决定肿

瘤对化疗敏感耐药与否的“开关”。

转化生长因子β(transforminggrowthfactorβ，TGF-β)是具有多种生物学活性

的多肽类细胞因子，已被证实为多种肿瘤EMT发生的主要诱导剂，通过诱导EMT

进而促进肿瘤侵袭转移［1，2］。研究［3－5］表明，肿瘤细胞对化疗药物(如顺

铂、紫杉醇、长春新碱)耐药与EMT密切相关。本研究利用TGF-β1对人宫颈癌

HeLa细胞EMT的诱导作用，为宫颈癌侵袭和转移的机制阐述及宫颈癌的临床治

疗提供新线索。

1材料与方法

1.1材料

人宫颈癌HeLa细胞，本实验室冻存;TGF-β1购自Peprotech;anti-E-cadherin、

anti-β-catenin、anti-Vimentin和anti-N-cadherin购自SantaCruz;DMEM和

胎牛血清(fetalbovineserum，FBS)购自Gibco;TRIzol和AMV反转录酶购自

Invitrogen;ECL显影试剂盒购自Amersham;国产试剂均为分析纯。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养及诱导EMTHeLa细胞复苏，37℃、5%CO2饱和湿度条件下在含

10%FBS的DMEM培养基中培养，0.25%胰酶消化传代于6孔板或培养瓶，分为

实验组和对照组。实验组用不含血清的DMEM培养基培养24h，然后用浓度为

10ng/mL的TGF-β1处理72h，诱导细胞EMT［6，7］。对照组用PBS代替

TGF-β1处理，其他条件与实验组相同。电镜下观察两组细胞形态变化。

1.2.2Westernblotting检测EMT相关分子表达用10ng/mL的TGF-β1处理

HeLa细胞72h后，收集细胞，按说明书操作提取蛋白。用Bradford法测定蛋白

浓度，等量蛋白样品上样，电泳并转膜，5%脱脂牛奶封闭2h。分别加一抗E-

cadherin、