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ELISIA试验及应用

酶联免疫吸附试验及其应用

酶联免疫吸附试验及其应用

作者：鲍行豪

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酶联免疫吸附试验及其应用

一、前言

近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分

析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年

代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代初期又建立

了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分

钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微

的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来，这种技术被称为酶联免疫吸附试验法

（Enzyme—LinkedImmunosorbentAssay，ELISA），本法自70年代初期由VAN

WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后，现已引起广泛重视。

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的

传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原

的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定

及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几

百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，

而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA

法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面：

1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。

2、研究抗酶抗体的合成。

3、显现微量的免疫沉淀反应。

4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

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酶联免疫吸附试验及其应用

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酶联免疫吸附试验及其应用

图1：竟争法测抗原示意图

2、双抗体夹心法

方法的基本原理可用图2来表示

图2.双抗体夹心法测抗原示意图

本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样

品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经

保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测

定，底物降解的量即为欲测抗原的量。

这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固

相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。因此，不能用于分子

量小于5000的半抗原之类的抗原测定。我们用在霍乱肠毒素的测定。HbSAg及HbS

的测定。

3、改良双抗体夹心法：本法是双抗体夹心法的一种改良形式，也是用于测定抗

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原的，其原理可用图3来表示。

图3.改良双抗体夹心法测抗原示意图

本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样

品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入的抗体b于第一次包

被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免

疫制备的，否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵

育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗

体。因此，放大的倍