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重组人干扰素α2b的制备研究

梁果义;刘晓航

【摘要】为了获得高活性高纯度的rhIFNα2b,对重组人干扰素α2b进行克隆、

表达,并深入研究了其纯化工艺.采用重叠延伸PCR法合成了编码IFNα2b的基因,

用DNA重组技术构建了原核表达载体pBV220-IFNα2b,获得了稳定的工程菌种.

发酵产物通过破菌、洗涤获得包涵体,再经过变性、复性、离子交换层析和凝胶过

滤层析的纯化,得到rhIFNα2b纯品,其比活可达1×108IU/mg.实验结果为进一步

开展临床前研究和长效制剂奠定了基础.

【期刊名称】《生物技术进展》

【年(卷),期】2016(006)003

【总页数】7页(P212-218)

【关键词】干扰素α2b;制备;表达;纯品

【作者】梁果义;刘晓航

【作者单位】北京双鹭药业股份有限公司,北京100043;北京双鹭药业股份有限公

司,北京100043

【正文语种】中文

干扰素是一类重要的细胞因子，具有普遍的生物学功能，可以抵抗病毒感染，影响

细胞生长、分化和调节生物机体免疫的功能。它在疾病的临床治疗上使用数年，在

治疗病毒性感染、癌症和多发性免疫疾病等方面都有广泛的应用。目前世界上包括

中国在内的50多个国家已批准干扰素上市，治疗约30多种疾病，如慢性乙型肝

炎(CHB)、SARS病毒、毛细胞白血病、尖锐湿疣、艾滋病患者的卡波济肉瘤、慢

性肉芽肿瘤、病毒性红眼病、病毒性角膜炎、唇和生殖器疱疹、水痘、慢性宫颈炎

和巨细胞病毒病[1～4]等。

目前所报道过的干扰素按照细胞结构和来源可分为α、β、γ干扰素3个型别,α干

扰素又称人白细胞干扰素，它是由B淋巴细胞和单核细胞产生的。α干扰素亚型

至少有23种，成簇分布于人第9号染色体的p22区，总长度1～2kb，没有内含

子。干扰素α2b是由165个氨基酸残基组成的单链多肽[3]，理论值分子量为19

237Da，含4个Cys残基，形成2个分子内二硫键(Cys1和Cys98、Cys29和

Cys138)，其中Cys29和Cys138之间的二硫键对IFNα2b形成特定的立体结构

和表现生物活性非常重要[5,6]。

IFNα2b等电点在pH5～6之间，在pH2.5的溶液中稳定，在0.1%SDS溶液中

稳定，对热亦稳定，对各种蛋白酶敏感。天然α干扰素无糖基化位点。

目前已有40kDaPEG修饰的IFN-α2a(Pegasys©)和12kDaPEG修饰的IFN-

α2b(PegIntron©Shering-Plough)应用于临床，这两类产品都能够延长IFN-α

在体内的半衰期。然而，PEG修饰的IFN-α在体外的抗病毒活性较之未经修饰的

IFN-α都有所降低[7]。修饰过的干扰素延长半衰期，改进药物治疗的有效性和耐

受性。干扰素的制备是干扰素药物研发的一个难点。虽然包涵体复性过程繁琐、收

率低，但是表达量高、成本低、生产周期短，干扰素通常以大肠杆菌包涵体的形式

表达。本研究通过基因工程方法拼接成功构建了原核表达载体pBV220-IFNα2b，

获得了工程菌种，改进了纯化方法，加入凝胶过滤层析，制备高纯度的样品，提高

了生物活性，以期为进一步开展药学研究和长效制备提供依据。

DH5α感受态细胞为全式金生物技术有限公司产品，质粒pBV220为本实验室保

存，DNA片段由北京三博远志生物技术有限责任公司合成；核酸纯化试剂盒、质

粒提取试剂盒为Omega公司产品；低分子量核酸标记物TaKaRaDL2000、

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