破伤风类毒素对甲型副伤寒脱毒脂多糖的免疫增强作用 .pdfVIP

破伤风类毒素对甲型副伤寒脱毒脂多糖的免疫增强作用

【摘要】目的增强多糖抗原在婴幼儿中的免疫原性，提供有效的免疫保护。

方法采用液体培养，收集菌体，脂多糖（LPS）提取，纯化脂多糖，活化脱毒

多糖（O-SP）与破伤风类毒素（TT）共价结合。ELISA法检测O-SP及结合物

的免疫效果。结果单纯甲型副伤寒脱毒脂多糖未能诱导小鼠产生抗体，而与TT

结合后，具有良好的免疫原性，能产生体液免疫反应，诱导小鼠产生较高水平的

抗脂多糖抗体和抗破伤风抗体。结论破伤风类毒类对甲型副伤寒脱毒脂多糖具

有免疫增强作用。

【Abstract】ObjectiveToincreasetheimmunognicityofdetoxified

lipopolysaccharideininfantileinordertoprovidestrongerprotection.MethodsThe

detoxifiedlipopolysaccharide（LPS）antigenwasobtainedandpurifiedfrom

S.ParatyphiAstrainwhichwasmultiplicatedbysubmergedculture.TheO-SPwas

covalentbondtotheTT.TheimmunityeffectwasdetectedbyELISA.ResultsThe

IgGantibodieswerenotdetectedintheserumofmiceimmunizedbydetoxified

lipopolysaccharideofS.ParatyphiAalone.TheconjugatecomposedofdetoxifiedLPS

andtetanustoxoidelicitedhighanti-LPSIgGandanti-TTIgGlevel.Conclusion

S.paratyphoidA-tetanushasimmunityenhancementtothedetoxified

lipopolysaccharide.

【Keywords】S.paratyphoidA;Tetanustoxoid;Immunogenicity

近年来我国西南及东南沿海省份甲型副伤寒病例逐渐增多，1998～2002年

浙江省3个地区发生了甲型副伤寒爆发病情,杭州市暴发流行5起［1］；贵州省

发生暴发流行16起［2］。因此，急需研究安全有效易于推广的甲型副伤寒疫苗

来满足疾病预防控制的需要。本次试验研究甲型副伤寒脱毒脂多糖与破伤风类毒

素结合后可以增强婴幼儿的免疫原性，提供有效的免疫保护并降低病菌携带率

［3］。动物试验结果表明结合后安全稳定，免疫原性优于单纯多糖。

1资料与方法

1.1试剂溴化氰（CNBr）、己二酰肼（ADH）、碳二亚胺（EDAC）、购自

Sigma公司SepharoseCL-6B凝胶、层析系统、组分收集器购自Phamacia公司。

1.2血清及抗原副伤寒多糖、抗血清；破类及破抗均由本室提供。

1.3实验动物实验动物由本所动物室提供。

1.4脱毒脂多糖的活化将浓缩的脱毒脂多糖溶于PBS中，加入CNBrpH11.0

反应6min，加入等体积ADH反应15min，以0.1molHCl调节并维持pH8,5左

右，反应12h,2℃～8℃。透析收集活化多糖。

1.5活化多糖与破类结合活化多糖浓度为5mg/ml，加入等量的破类调

PH5.4，加入EDAC维持PH5.4冰浴4h，透析48h，离心收集上清；Sepharose4FF

层析收峰后除菌过滤，2～8℃保存。

1.6动物安全试验

1.6.1异常毒性试验体重18～22g小鼠5只，腹腔注射0.5ml，250～350g

豚鼠2只，腹腔注射5ml，观察7d。

1.6.2异常毒性试验体重250～350g豚鼠4只皮下注射2ml/只于7、14、

21d观察。

1.6.3毒性逆转试验将结合物37C放置42d，接种体重250～350g豚鼠4

只，皮下注射5ml/只，于7、14、21进行观察。

1.6.4ELIS