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分光光度计的原理与应用

分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪

器。它是现代实验室检测用的常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及

细菌生长浓度的定量。在印染方面，我们可以用分光光度计测量染色

时染料的上染百分率，以及整理在织物上助剂的浓度，还可以用于颜

色的测量。同时它还广泛地应用于食品检测、农药的检测及工业上石

油的检测等。紫外可见分光光度计在实验中的应用非常广泛，故我们

要熟悉并掌握它的原理及应用。

一、分光光度计的组成

各种型号的可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基

本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。

1.光源

在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气

体放电光源。热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电

光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。

2．单色器

单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等

部分。单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常

用棱镜和光栅。

3.吸收池

吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸

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收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1～

10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。

4、检测器

检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使

用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。

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5、信号显示系统

常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自

动记录和数字显示装置等。

二、分光计的分类

国际上一般按紫外可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、

准双光束、双光束和双波长四类。

单光束可见分光光度计光度准确度差。常见的721、751、753、

754等可见分光光度计都是单光束仪器，因为他们的分析误差较大，

所以,它们在使用上受到限制。一般来讲,对要求较高的制药行业、

质量检验行业、科研等行业不适宜使用单光束紫外可见分光光度计。

准双光束紫外可见分光光度计有两种类型:一种是两束单色光,

一只比色皿,两只光电转换器;另一种是一束单色光,一束复合光,

一只比色皿,两只光电转换器。常见类型有TU-1800、TU-1800S、

TU-1800PC、TU-1800SPC、UV-762、UV-1600等。

双光束紫外可见分光光度计就是有两束单色光的紫外可见分光

光度计。它有两种类型:一种是两束单色光,两只比色皿,两只光电

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转换器;另一种是两束单色光,两只比色皿,一只光电转换器。目前,

国内外的双光束紫外可见分光光度计中,两只光电转换器的双光束

紫外可见分光光度计仪器已很少见。

双波长紫外可见分光光度计都采用两个单色器。光源发出的光被

两个单色器分别分离出波长为λ1和λ2,通过斩波器将两束单色光

λ1和λ2交替入射到同一试样中,光电倍增管交替地接收到经过

试样吸收后的这两束单色光,并把它们变成电信号。常见的类型有

WFZ800-5，UV-265。

三、原理及测试方法

原理：朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的

稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即

A=εLc

式中比例常数ε与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有

关。c为吸光物质浓度，L为透光液层厚度。

测试方法：

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（1）最大吸收波长λmax的测定：配置任意浓度的染液，用1

㎝厚的比色皿在分光光度计上测定不同波长时的吸光度值，要求读数

范围在0.2～0.8。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，作出吸收

光谱曲线图，从而得出该浓度下染料的最大吸收波长λmax。

吸收光谱曲线图

（2）标准工作曲线的测定：分别测定不同浓度染液在最大吸收

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波长λmax时的吸光度值，然后以染液浓度为横坐标，以测定的吸光

度值为纵坐标作图，得到该染料的标准工作曲线图。

（3）测未知液的浓度：在