Sox9和Ⅱ型胶原蛋白在人腰椎间盘退变中的表达及意义 .pdfVIP

Sox9和Ⅱ型胶原蛋白在人腰椎间盘退变中的表达及意义

目的探讨Sox9和Ⅱ型胶原蛋白（Col2al）在人类腰椎间盘退变中的表达

及意义。方法应用免疫组织化学在退变和正常腰椎间盘组织中分别检测Sox9

和Ⅱ型胶原蛋白的表达，并分析其相关性。结果实验组Sox9染色阳性率为

20.0%（6/30），对照组Sox9染色阳性率为76.7%（23/30），两组间染色阳性率有

显著性差异（P＜0.05）。实验组Col2al染色阳性率为33.3%（10/30），对照组

Col2al染色阳性率为83.3%（25/30），两组间染色阳性率有显著性差异（P＜0.05）。

退变腰椎间盘中6例Sox9阳性者中，仅1例Col2al表达阴性，而在10例Col2al

表达阳性者中，5例Sox9表达阴性，二者同时阳性5例，同时阴性表达19例。

退变椎间盘中Sox9和Col2al的表达呈显著正相关（P＜0.05）。结论Sox9和Ⅱ

型胶原蛋白表达降低与腰椎间盘退变有关，Sox9可能通过下调Col2al的表达，

共同参与腰椎间盘退变。

标签：Sox9；Ⅱ型胶原蛋白；腰椎间盘退变；免疫组织化学

随着老龄化社会在中国的到来，颈、腰椎椎间盘退变所致颈肩痛、腰腿痛的

发病率已逐渐增高，并且每年均要耗费相当的人力财力进行治疗。其治疗手段主

要包括保守治疗和手术治疗，然而无论是脱水、镇痛、理疗等保守治疗还是各种

微创或开放手术方法均不能从根本上阻止椎间盘退变的发生和发展，并且手术治

疗还可能破坏脊柱运动的生理完整性，具有易复发、胃肠道反应等风险和并发症

[1]。因此在已有研究基础上，针对椎间盘退变的靶点基因，通过基因治疗的方

法来阻止或改变椎间盘退变，以成为颈腰椎疾病基础研究的热点课题之一。

Sox9（SRYrelatedhighmobilitygroupboxgene9）基因最早是作为早期胚胎

发育相关基因而被发现，但在之后的研究中逐渐被发现具有调控软骨细胞发育、

成熟的重要功能[2-3]。比如在关节炎患者中致炎因子通过抑制Sox9的软骨调控

作用，减弱病变软骨的再生和修复，从而引起关节炎迁延不愈[4]。而同样以软

骨样细胞为主的椎间盘组织中Sox9基因的表达情况如何呢？我们采用免疫组织

化学研究腰椎间盘退变临床标本中Sox9及其下游Col2al（Ⅱ型胶原蛋白）的表

达情况，并探讨其机制，以期为分子水平预防和治疗人类椎间盘退变性疾病提供

实验基础。

1材料与方法

1.1材料

选取2010年1月～2012年12月于我院住院因腰椎间盘突出症、腰椎滑脱、

腰椎管狭窄等入院后路手术所取得的腰椎间盘患者30例作为实验组，患者年龄

均50岁，其中男16例，女14例，标本均经病理证实为退变椎间盘。选取腰椎

外伤后路手术取出腰椎间盘标本30例作为对照组，患者年龄16～30岁，标本均

经病理证实为正常椎间盘，其中男18例，女12例。

1.2主要试剂

Sox9兔多克隆抗体、Col2al鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术

有限公司，即用型超敏S-P免疫组化试剂盒、DAB显色液为福州迈新生物工程

有限公司产品。多聚赖氨酸购自sigma公司。

1.3实验方法

1.3.1标本制备标本均经4%多聚甲醛固定6～8h。常规脱水，石蜡包埋，4μm

切片，采用HE染色和免疫组化染色。

1.3.2免疫组织化学染色采用S-P免疫组织化学染色超敏试剂盒，按期说明

书进行实验。石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗5min×2次，蒸馏水新鲜配制3%过

氧化氢液，灭活内源性过氧化物酶，PBS洗3min×3次。将切片浸入0.01M枸橼

酸盐缓冲液，微波炉加热沸腾，5～10min后，反复1～2次；PBS洗3min×3次，

封闭血清37℃孵育10min；滴加一抗，4℃孵育12h，PBS洗3min×3次；滴加生

物素标记的二抗，37℃孵育10min，PBS洗3min×3次；滴加链霉菌抗生物素-

过氧化物酶溶液，37℃孵育10min，PBS洗3min×3次；滴加DAB显色剂，镜下

确定反应时间终止。显色完成后，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中

性树脂封片；显微镜下观察染色结果。