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二乙基亚硝胺在小鼠诱发性肝癌模型中的应用

赵彤;李柏

【摘要】DEN二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)对人体和动物都存在剧毒

性,即使是小剂量注射或口服给药也会造成严重的肝损伤.由于对啮齿类动物诱导肝

脏病变的稳定性,DEN常用于观察啮齿类动物肝癌形成全过程中形态学的改变以检

测其癌前病变.在应用DEN后小鼠产生的肝损伤会引起肝硬化和肿瘤,使其成为分

析人类肝细胞癌的发病机制和过程的理想动物模型.然而,一些研究表明,二乙基亚硝

胺的致癌作用可能与动物不同遗传背景,性别,年龄等其他因素相关.因此,本文通过对

相关文献进行综述,以期建立稳定,成功率高,死亡率低的DEN模型,并对不同目的的

实验提供参考.

【期刊名称】《中国比较医学杂志》

【年(卷),期】2016(026)001

【总页数】5页(P76-80)

【关键词】二乙基亚硝胺;诱发性肝癌;小鼠;模型,动物

【作者】赵彤;李柏

【作者单位】第二军医大学中医系,上海200433;第二军医大学中医系,上海

200433

【正文语种】中文

【中图分类】R-332

肝癌是威胁人类健康的主要原因之一，在肿瘤致死率中排名第二[1]。原发性肝癌

的发生是一个多病因、多阶段的结果，依次经历肝炎-肝硬化-早期肝癌-进展期肝

癌-肝癌转移[2]。期间可能涉及各种致病因素[3-4]，如病毒性肝炎，酒精性肝硬化

等[5-6]，从初始的病毒感染到临床检测出肝癌的平均间隔通常为20至40年[7-8]。

啮齿类动物小鼠模型是广为应用的肝癌动物模型[8-11]。在诱发性肝癌模型中，

DEN[12-13]、二甲基亚硝胺、四氯化碳(carbontetrachloride，CCl4)等物质是

常用致癌诱导剂[14-15]。其中，DEN是一种归属于N-亚硝基的有机物质，可稳

定诱导多种组织肿瘤，如肝脏，肺脏，胃和造血系统[16]。DEN造模可产生严重

的肝损伤，具有致癌性，突变性和致畸性，最突出的表现是中性粒细胞浸润，广泛

的小叶出血性坏死，肝细胞异常分裂，胆管增生，纤维化，和桥接坏死，并最终导

致肝癌。但是有研究显示亚硝胺对于不同遗传背景，性别等的小鼠作用不一，给药

时间和剂量的不同也可能影响实验结果。因此本文旨在通过总结既往文献研究，提

出适用于小鼠的DEN使用方案，建立高效的DEN小鼠肝癌模型。

DEN作为N-亚硝基类物质的一种，是遗传毒性致癌物，通过比较基因组学分析，

发现在DEN引起的肿瘤模型中的基因表达，与人类肝癌患者的肝癌组织类似且预

后较差[17]。经典的DEN诱癌分为启动-促进-演变三个过程，诱导脱氧核糖核酸

(deoxyribonucleicacid，DNA)损伤和突变以及肝细胞死亡。由于其急性肝毒性

和致癌性，少量的DEN即可对小鼠产生不可逆的致癌作用。1963年的研究发现，

从服用DEN的大鼠肝脏中提取核酸，发现其N7原子鸟嘌呤乙基化，这一发现在

解释DEN诱癌的分子机制研究上是一重大进展[18]。随后的研究发现DEN最终

在小鼠体内转化为可以导致DNA加合物形成的烷基化代谢物，形成活性中间体，

这会导致甲基化大分子的形成。其中最关键的是DNA中N-7甲基鸟嘌呤和O6-

甲基鸟嘌呤的形成，改变了遗传信息，从而形成启动细胞，在致癌过程中起到了启

动作用。这一转化过程是通过与细胞色素P450酶类(包括细胞色素P4502E1)相关

通路实现的[19]，其主要靶器官是肝脏，在小叶中心肝细胞活性最高，且这一途径

与人类代谢途径相似。

DEN模型通常被认为是化学性诱导的肝癌模型，也有证据表明和炎症反应相关。

DEN造成的肝细胞损伤激活肝巨噬细胞枯否细胞，产生肝有丝分裂原，如白细胞

介素-6(interleukin-6，IL-6)，这会刺激残存的肝细胞代偿性增生[20]。DEN诱

导的肝癌发生被认为是受炎症信号的影响，肝细胞IκB激酶β(inhibitorkappaB

kinaseβ，IKKβ)损失，阻止核转录因子(nucleartranscriptionfactorkappaB，

NF-κB)的活化，增加DEN诱发的细胞死亡，从而增强致癌效果[21]。DEN也与

肝细胞的活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的积累相关[22-23]