一种破伤风类毒素疫苗的制备方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN102961741A

(43)申请公布日2013.03.13

(21)申请号CN201210533681.9

(22)申请日2012.12.10

(71)申请人武汉生物制品研究所有限责任公司

地址430060湖北省武汉市武昌区临江大道9号

(72)发明人李佩珊陈亮白磊凌霜杨以梅杨海燕薛红刚李新国

(74)专利代理机构武汉开元知识产权代理有限公司

代理人樊戎

(51)Int.CI

A61K39/08

A61P31/04

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种破伤风类毒素疫苗的制备方法

(57)摘要

本发明公开了一种破伤风类毒素疫

苗的制备方法，该方法是以破伤风梭状芽

孢杆菌菌株为原料，经过破伤风类毒素的

培养、菌液分离、超滤浓缩、盐析和超滤

脱盐等步骤制备而成的。本发明先将培养

液进行脱毒处理，再进行精制，从而减少

板框过滤除去菌体的过程中菌体和其他杂

质碎片对板框膜包的堆积引起的孔道堵

塞，增加过滤过程中的流畅性；通过改进

盐析方法，有效去除了培养液中的毒素蛋

白和其他致敏原；培养液的浓缩和盐析后

的脱盐方法采用的均是切向流超滤方法，

减少了因对毒素蛋白的剪切造成的抗原破

坏，避免了蛋白的沉淀。本发明缩短了破

伤风类毒素疫苗的制备时间，提高了生产

效率。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种破伤风类毒素疫苗的制备方法，其特征在于：将破伤风菌种经传

代发酵，甲醛脱毒后，将培养液调节pH至6.9~7.5，过滤除去菌体，将

滤液用孔径为10~40KD的超滤膜进行超滤，直至滤液的体积为原体

积的1/6~1/8，再向滤液中加入质量体积比为20~30%的硫酸铵盐析，

静置24小时后离心分离，将离心后的沉淀用注射用水完全溶解后，

再次用孔径为10~40KD的超滤膜超滤，直至滤液中硫酸铵的质

量百分含量小于0.025%。

2.根据权利要求1所述的破伤风类毒素疫苗的制备方法，其特征在于：所

述超滤膜的孔径为30KD。

3.根据权利要求1所述的破伤风类毒素疫苗的制备方法，其特征在于：所

述超滤的压力为10~15psi，流速为200~220L/小时。

4.根据权利要求1所述的破伤风类毒素疫苗的制备方法，其特征在于：向

滤液中加入质量体积比为25~27%的硫酸铵盐析。

5.根据权利要求1所述的破伤风类毒素疫苗的制备方法，其特征在于：所

述过滤除去菌体采用的是板框过滤。

说明书

p技术领域

本发明涉及一种破伤风类毒素疫苗的制备方法。

背景技术

破伤风类毒素是由破伤风梭菌产生并分泌至菌体外的一种蛋白质，由

1315个氨基酸组成，分子量为150700Da。最初用于人免疫接种的是

破伤风原制类毒素，这种类毒素免疫效果好，但接种后副反应很大，

甚至有过敏休克死亡的病例。这主要是在原制类毒素中存在着大量水

解不完全的蛋白成分，引起过敏反应。为了减轻接种的副反应，1923

年Ramon对破伤风原制类毒素进行了精制纯化，制备出了精制破伤风类

毒素。通过使用观察，精制破伤风类毒素的接种后副反应比原制类毒

素显著减少。

精制破伤风类毒素在生产中要进行脱毒，由于原制毒素中含有大量的

培养基成分,在脱毒过程中,容易通过甲醛与毒