透明质酸酶及其制备方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN104140952A

(43)申请公布日2014.11.12

(21)申请号CN201410388804.3

(22)申请日2014.08.08

(71)申请人山东威高新生医疗器械有限公司

地址264209山东省威海市高技术产业开发区兴山路18-5号

(72)发明人王维华吕汝举刘美静庄巍王英超

(74)专利代理机构青岛高晓专利事务所

代理人宋文学

(51)Int.CI

C12N5/075

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

透明质酸酶及其制备方法

(57)摘要

本发明公开了一种透明质酸酶及其

制备方法，该透明质酸酶包含对卵子进行

处理的组合物、杀菌剂及指示剂。本发明

的透明质酸酶各项指标达到体外培养液的

标准使用安全且易于判断培养液是否变

质，为辅助生殖技术提供有力保证。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种透明质酸酶，其特征在于，包含对卵子进行处理培养的组合物、杀菌剂及指

示剂。

2.根据权利要求1所述的透明质酸酶，其特征在于，所述杀菌剂为庆大霉素9.5-

10.5mg/L。

3.根据权利要求1所述的透明质酸酶，其特征在于，所述指示剂为酚红，浓度9.5-

10.5mg/L。

4.根据权利要求1所述的透明质酸酶，其特征在于，所述组合物中包含氯化钠

92.815-102.585mmol/L,氯化钾4.465-4.935mmol/L，硫酸镁0.19-0.21mmol/L，氯化

钙1.9-2.1mmol/L，碳酸氢钠3.8-4.2mmol/L，4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES19.95-

22.05mmol/L，葡萄糖2.66-2.94mmol/L，丙酮酸钠0.314-0.347mmol/L、乳酸钠

2.274-2.514g/L、丙氨酰谷氨酰胺0.95-1.05mmol/L、牛磺酸0.095-0.105mmol/L，非

必需氨基酸0.95%-1.05%,v/v，磷酸二氢钾0.352-0.389mmol/L,庆大霉素9.5-

10.5mg/L,酚红9.5-10.5mg/L,人血清白蛋白11.4%-12.6%,v/v，透明质酸酶247.57-

273.63mg/L。

5.根据权利要求4所述的透明质酸酶，其特征在于，所述非必需氨基酸为L-丙氨

酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸中的

一种或者几种。

6.根据权利要求1所述的透明质酸酶，其特征在于透明质酸酶的溶剂采用超纯水。

Claim7.制备权利要求1-6所述的透明质酸酶的方法，其特征在于包括下面步骤：

（1）透明质酸酶基础液的配制

a、先按照比例称量各组分，并分开放置；

b、先将除杀菌剂、指示剂、碳酸氢钠外的称量好的组分溶于超纯水中，溶解过程

中遵循先固体后液体，NaHCOSub3/Sub最后加入的原则；

c、向步骤b所得溶液中加入称量好的杀菌剂、指示剂和NaHCOSub3/Sub；

d、检测溶液渗透压和pH值，如果pH值不在范围内则用配制好的盐酸和氢氧化钠

溶液调节pH值，并记录最终渗透压和pH值；

（2）透明质酸酶原液的配制

a、在基础液中加入透明质酸酶，在超净工作台下利用0.2μm的滤膜过滤除菌，得

到滤液A；

b、在滤液A中加入人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得到透明质酸酶的原液；

（3）透明质酸酶原液的处理

在无菌环境下对过滤后的溶液进行分装封口，得到市售的透明质酸酶，将其放置冰

箱或冷库内保存；

（4）透明质酸酶进行检测

检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒

素、体外鼠胚试验来判断透明质酸酶是否合格。