(二)过敏性试验方法1、被动皮肤过敏试验(PCA) .pdfVIP

(二)过敏性试验方法1、被动皮肤过敏试验(PCA) .pdf

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表6皮肤反应的评分标准

红斑和焦痂形成分值水肿形成分值

无红斑0无水肿0

非常轻的红斑,勉强可见1非常轻度水肿,勉强可见1

明显的红斑2轻度水肿(边缘清晰)2

中度至重度的红斑3中度水肿(皮肤隆起约1mm)3

重度红斑(鲜红色)至轻度重度水肿(皮肤隆起大于

焦痂形成(深层损伤)41mm,并超过涂受试物的区4

域)

4.5结果评价

单纯涂受试物而未经照射区域未出现皮肤反应,而涂受试物后经照射

的区域出现皮肤反应分值之和为2或2以上的动物数为1只或1只以上时,

判为受试物具有光毒性。

(二)过敏性试验方法

1、被动皮肤过敏试验(PCA)

将致敏动物的血清(内含丰富的IgE抗体)皮内注射于正常动物。IgE

与皮肤肥大细胞的特异受体结合,使之被动致敏。当致敏抗原激发时,引

起局部肥大细胞释放过敏介质,从而使局部血管的通透性增加,注入染料

可渗出于皮丘,形成蓝斑。根据蓝斑范围判定过敏反应程度。

1.1实验动物

PCA反应常用的动物是大鼠,亦用小鼠,有时根据试验需要用豚鼠,

选择动物时应考虑IgE的出现时间。

1.2试验分组

应设立阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对照组应给予同

体积的溶媒,阳性对照组给予1-5mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致

18

2

敏阳性物质,受试物低剂量组给予临床最大剂量(/kg或m),受试物高剂

量组给予低剂量的数倍量。每组动物数至少6只。

1.3致敏

1.3.1抗体的制备

选择容易产生抗体的给药方法,如静脉、腹腔或皮下注射等,隔日一

次,共3-5次。末次致敏后10-14天左右采血,2000转/分离心10分钟,分

离血清,-20℃保存,2周内备用。

1.3.2被动致敏

上述各组抗血清应根据反应特点决定稀释倍数,一般用生理盐水稀释

成1:2、1:4、1:8、1:16或1:32等。在动物背部预先脱毛3×4cm2的

皮内注射各对应组的抗血清0.1mL,进行被动致敏。

1.4激发

被动致敏24或48小时后,各组静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加

等量的0.5-1%伊文思兰染料共1mL,进行激发。由于不同种属动物接受含

IgE抗体血清后,至能够应答抗原攻击产生过敏反应的时间不同,因此需注

意激发时间选择的合理性。

1.5结果测定

30分钟后麻醉处死各组动物,剪取背部皮肤,测量皮肤内层的斑点大

小,直径大于5mm者判定为阳性。不规则斑点的直径为长径与短径之和的

一半。

2、全身主动过敏试验(ASA)

对致敏成立的动物体内,静脉注射抗原,观察抗原与IgE抗体结

19

合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性

过敏反应。

2.1实验动物

通常选用体重为300-400克的豚鼠。

2.2试验分组

应设立阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对照组应给予同

体积的溶媒,阳性对照组给予1-5mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致

敏阳性物质,受试物低剂量组给予临床最大剂量(/kg或m2),受试物高剂

量组给予低剂量的数倍量。每组动物数至少6只。

2.3致敏

选择容易产生抗体的给药方法,如静

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