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表6皮肤反应的评分标准
红斑和焦痂形成分值水肿形成分值
无红斑0无水肿0
非常轻的红斑,勉强可见1非常轻度水肿,勉强可见1
明显的红斑2轻度水肿(边缘清晰)2
中度至重度的红斑3中度水肿(皮肤隆起约1mm)3
重度红斑(鲜红色)至轻度重度水肿(皮肤隆起大于
焦痂形成(深层损伤)41mm,并超过涂受试物的区4
域)
4.5结果评价
单纯涂受试物而未经照射区域未出现皮肤反应,而涂受试物后经照射
的区域出现皮肤反应分值之和为2或2以上的动物数为1只或1只以上时,
判为受试物具有光毒性。
(二)过敏性试验方法
1、被动皮肤过敏试验(PCA)
将致敏动物的血清(内含丰富的IgE抗体)皮内注射于正常动物。IgE
与皮肤肥大细胞的特异受体结合,使之被动致敏。当致敏抗原激发时,引
起局部肥大细胞释放过敏介质,从而使局部血管的通透性增加,注入染料
可渗出于皮丘,形成蓝斑。根据蓝斑范围判定过敏反应程度。
1.1实验动物
PCA反应常用的动物是大鼠,亦用小鼠,有时根据试验需要用豚鼠,
选择动物时应考虑IgE的出现时间。
1.2试验分组
应设立阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对照组应给予同
体积的溶媒,阳性对照组给予1-5mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致
18
2
敏阳性物质,受试物低剂量组给予临床最大剂量(/kg或m),受试物高剂
量组给予低剂量的数倍量。每组动物数至少6只。
1.3致敏
1.3.1抗体的制备
选择容易产生抗体的给药方法,如静脉、腹腔或皮下注射等,隔日一
次,共3-5次。末次致敏后10-14天左右采血,2000转/分离心10分钟,分
离血清,-20℃保存,2周内备用。
1.3.2被动致敏
上述各组抗血清应根据反应特点决定稀释倍数,一般用生理盐水稀释
成1:2、1:4、1:8、1:16或1:32等。在动物背部预先脱毛3×4cm2的
皮内注射各对应组的抗血清0.1mL,进行被动致敏。
1.4激发
被动致敏24或48小时后,各组静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加
等量的0.5-1%伊文思兰染料共1mL,进行激发。由于不同种属动物接受含
IgE抗体血清后,至能够应答抗原攻击产生过敏反应的时间不同,因此需注
意激发时间选择的合理性。
1.5结果测定
30分钟后麻醉处死各组动物,剪取背部皮肤,测量皮肤内层的斑点大
小,直径大于5mm者判定为阳性。不规则斑点的直径为长径与短径之和的
一半。
2、全身主动过敏试验(ASA)
对致敏成立的动物体内,静脉注射抗原,观察抗原与IgE抗体结
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合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性
过敏反应。
2.1实验动物
通常选用体重为300-400克的豚鼠。
2.2试验分组
应设立阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对照组应给予同
体积的溶媒,阳性对照组给予1-5mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致
敏阳性物质,受试物低剂量组给予临床最大剂量(/kg或m2),受试物高剂
量组给予低剂量的数倍量。每组动物数至少6只。
2.3致敏
选择容易产生抗体的给药方法,如静
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