DBXM074-2020普通级实验用猫体内胚胎生产操作指南.doc

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普通级FORMTEXT实验用猫体内胚胎生产操作指南

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（征求意见稿）

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT吉林省市场监督管理厅???发布

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FORMTEXT吉林省地方标准

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前??言

本标准按GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省科学技术厅提出并归口。

本标准起草单位：吉林大学。

本标准主要起草人：俞先峰、袁宝、任文陟、张明军、陈健、刘殿峰、张嘉保、金永勋、胡进平、权福实、高巍。

普通级实验用猫体内胚胎生产操作指南

范围

本标准规定了猫胚胎生产的术语与定义、超数排卵、配种或腹腔镜输精、手术冲胚及胚胎质量鉴定的技术操作规程。

本标准适用于普通级实验用猫体内胚胎生产操作。

术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2．1供体donor

用于胚胎生产的母猫和提供精子的公猫(12月龄以上健康成年猫)。

2．2超数排卵superovulation

应用外源性促性腺激素诱发卵巢多个卵泡发育，并排出具有受精能力的卵子的方法，简称“超排”。

超数排卵

药品

所用药品见附录A。

超排方法

每隔12h给供体母猫肌肉注射10～15mg促卵泡素（FSH，宁波第二激素厂）,连续注射6次，最后一次注射FSH的同时肌肉注射10ug促黄体素释放激素A3（LHRH-A3，宁波第二激素厂）。

供体准备

4.1雄性供体

a)微生物质量符合DB22/T2591-2016要求；

b)谱系记录无遗传性疾病；

c)体质健壮；

d)生殖机能正常；

d)精液品质质量要求（精子活力70%以上，畸形率少于20%）。

4.2雌性供体

a)微生物质量符合DB22/T2591-2016要求；

b)谱系记录无遗传性疾病；

c)体质健壮；

d)生殖机能正常；

自然交配或腹腔镜输精

5.1自然交配

a)将公猫和雌猫合笼时应提供安静的环境

b)注射LHRH-A3后立即放入成年公猫并观察其交配行为。

5.2腹腔镜深部输精

5.2.1输精前供体母猫的准备

5.2.2精子采集和稀释

将公猫和发情的母猫合笼，当公猫爬跨到母猫身上预进行交配时迅速将提前准备好的试管套在阴茎上采集精液。采集的精液应保持在35℃左右，并根据精子密度和活力，按照1：3～1:5进行稀释，将精液浓度调至2000万/ml。

稀释液成分：葡萄糖、柠檬酸钠、卵黄

5.2.3腹腔镜输精过程描述，器材见附录A。

按下列要求进行腹腔镜深部输精：

a)麻醉及保定：肌肉注射二甲苯胺噻唑1～2ml,使其在手术架上仰卧，四肢用绳索保定；

b)剃除手术部位的猫毛；

c)用2%～4%碘伏消毒手术部位，并停留2min～5min；

d)用75%酒精对手术部位脱碘、晾干；

e)在距离最后一对乳房前1cm、腹中线大约2～3cm的左侧和右侧位置，分别用手术刀片切开2mm左右的小口，左侧用腹腔镜穿刺器插入腹腔，抽出内芯，插入腹腔镜镜头；右侧腹腔镜穿刺器穿透腹腔内膜后，取出穿刺器，手术钳从孔内插入，与左侧腹腔镜镜头配合，当观察到子宫角后，换输精枪进入，将针尖插入到子宫腔内，每侧输入精子数不少于0.5x107。

6冲胚及胚胎质量鉴定

6.1冲胚步骤

6.1.1术前准备

手术冲胚所需器材和药品见附录A。按附录B做好采胚记录。

6.1.2供体猫手术

手术部位在距离最后一对乳房前端2cm、腹中线大约0.5cm的左侧或右侧位置，尽量避开血管。

a)距手术12h,禁饮禁食；

b)前期手术准备见4.2.3；

c)避开可见血管，用灭菌的手术刀将手术部位纵向切开1～2cm的刀口，暴露肌膜；

d)用手术刀将腹部肌膜轻轻切开小口后钝性分离肌肉层和腹膜；

e)将手术挂钩从刀口插入后，将子宫角和卵巢引出刀口外，记录两侧卵巢排卵点或黄体数。

6.1.3输卵管冲胚法