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蕙兰种苗组培生产技术规程

1范围

本文件规定了蕙兰种苗组培生产的培养基配制和灭菌、种苗组培、组培苗驯化、移栽、病虫害管理、出圃规格和生产记录的要求。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

GB/T8321.10农药合理使用准则（十）

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义

4培养基配制和灭菌

4.1培养基配制流程

按培养基配方称取一定量MS培养基干粉、蔗糖、蛋白胨、激素和琼脂粉，加入一定量的蒸馏水加热至琼脂完全溶解后，用1M/L的HCl或1M/L的NaOH溶液调节pH值至5.4～5.8，趁热把30ml～50ml培养基分装于组培瓶中。

4.2培养基配方

种子播种配方：1/2MS+0.5mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+0.5g/L（活性碳），pH值5.1～5.4。

茎尖诱导配方：1/2MS+1.5mg/L（6-苄氨基腺嘌呤）+1.5mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。

增殖配方：1/2MS+0.5mg/L（萘乙酸）+蔗糖20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+0.5g/L（活性碳）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。

诱芽配方为：1/2MS+（1～3）mg/L（6-苄氨基腺嘌呤）+（0.5～1）mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。

生根配方：1/2MS+（0.2～0.5）mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+0.5g/L（活性碳）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。

4.3高压灭菌

在高压蒸汽灭菌器内压力0.12MPa，121℃灭菌30min。接种工具（包括镊子、手术刀、垫盘等）可随培养基一起灭菌，灭菌后放置接种室，接种过程中采用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌。

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5种苗组培

5.1原球茎诱导培养

5.1.1种子繁殖

5.1.1.1蒴果采收与保存

选择授粉后5个月～6个月、种皮微黄的蒴果采收备用，2个月内播种的蒴果保存于4℃低温冰箱，12个月内播种的蒴果保存于-20℃低温冰箱。

5.1.1.2蒴果灭菌

蒴果用75%酒精表面消毒后放置于无菌接种室超净工作台，放入0.1%的HgCl2溶液浸泡10分钟，取出晾干，浸入95%酒精3s，取出即刻在酒精灯上点燃，待蒴果表面酒精燃烧完，放置于无菌垫盘备用。

5.1.1.3种子无菌播种

在超净工作台上用解剖刀切开朔果，取出种子，放入高温灭菌后的液体播种培养基，摇晃组培瓶使种子浸泡并分散于营养液中，一个蒴果无菌播种8瓶～10瓶。

5.1.1.4种子萌发

无菌播种后暗培养，室温23℃,3个月～12个月后种子开始萌发形成原球茎。

5.1.2茎尖快繁

5.1.2.1茎尖采集和消毒

5月～6月，选取蕙兰优良品种生长健壮、无病虫害植株的2.0cm～3.0cm新生芽，用锋利刀片从母株的基部切取芽，用中性洗涤剂浸泡洗涤后，再用流水冲洗干净，剥去外层苞片。在超净工作台上用75%酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，后用0.1%的HgCl2溶液消毒5min，无菌水冲洗3次。

5.1.2.2原球茎诱导

在超净工作台上将已经消毒的新芽置于无菌接种盘上，剥去新生芽周围的所有叶片，用解剖刀剥取2mm～3mm茎尖接种于诱导培养基，室温23℃,光照强度1500lux，光照时间8h/d，2个月～3个月后诱导出原球茎。

5.2继代培养

原球茎转继代培养基，室温23℃,光照强度2000lux，光照时间10h/d，培养2个月～3个月后生长成为根状茎，根状茎在生长过程中，又形成多个突起，生成丛生型根状茎，再将根状茎切割后转移到增殖培养基，3个月～6个月继代培养一次。

5.3芽分化培养

将丛生型根状茎转入诱芽培养基，温度23℃,光照强度3000lux，光照时间12h/d，培养3个月～6个月后小芽生长至2cm～3cm。

5.4生根培养

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待芽高2cm～3cm时转入生根培养基，培养温度23℃,光照强度3000lux，光照时间10h/d，培养3个月～4个月后，组培苗生长成高8cm～10cm，根长5cm