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【组培专题8】组织培养过程中常见问题解答

1、两次培养基用的配方都一样，为什么一个凝固的特好，一个就凝固不了？

培养基的凝固与否有下列几种情况决定：

1、琼脂批次有变，没有做批次试验，沿用以前的用量造成不足。

2、大量元素重复加入，或大量元素母液配制时出错。

3、pH值调的过低，或有活性炭高压灭菌时间过长，造成蔗糖分解量剧增，影响培养基的pH值降低较多。

4、加入新的天然附加物，或附加物过多。?

2、75%的酒精和70%的酒精有什么区别，组培时用哪种好?

酒精的70%和75%都是可以的，但往往由于桶装酒精的浓度达不到95%，这样按照70%的配制就达不到要求了，因此我们一般是桶装按照75%的配，瓶装则按照70%的配。?

3、大型灭菌器在灭菌的时候总会出现个别瓶子破裂的现象，请问什么原因？是温度过高，压力过大，还是内部冷热不均造成的呢？

高压灭菌造成玻璃瓶的破裂，特别是大型灭菌装置，最主要还是在放气冷却时造成的。究其原因，应该是在放气时，由于容积较大，压力在不同位置（内外部）的变化速度并不相同，致使瓶内与瓶外的压力差距较大，如果是封口膜，表现的可能就是塑料膜的破裂。?

4、初代培养时，外植体出现发白，慢慢枯死，是什么原因？

外植体的初代培养出现这种情况，是比较好理解的。大田植物材料离体以后，进入不同环境中继续生存代谢，需要一个过渡。

首先，植物材料要吸收培养基的养分，不再是根吸收，盐类浓度相对于离体的植物材料的吸收能力可能是过量的，植物材料褪色就是叶绿素形成受阻和细胞代谢受阻，另外培养基养分供应的有效性滞后，以及植物材料本身内含物向培养基的流失等等。建议在初代培养阶段最好先采用空白培养。?

5、做无毒苗的快繁，一直找不到合适的培养基，能不能推荐一种？

关于组培快繁的方式概括起来有下列两种途径：

1、外植体－愈伤组织－再生芽－继代－生根－出苗

2、外植体－丛生芽－继代－生根－出苗

至于采取那种途径，需要彻底了解所选组培植物的生物习性，包括繁殖方式，顶端优势，萌孽生根能力等。?

6、一般情况下

KT的母液应该配成多大浓度？IAA能高压灭菌吗？高压灭菌成分会变吗？

KT一般配成0.05－0.1ppm。IAA极不耐高压灭菌，一般采用过滤灭菌。如果利用高压灭菌其分解率会在85%以上，致使其作用不明显。?

7、植物病毒检测的简便方法？

由于经过脱毒处理，即使未完成脱除病毒的植株，其体内病毒的含量也会较低，常常在最初的一、二次病毒检测中呈阴性，因此有人建议在前18个月内，必须对植株进行若干次检测。目前常用的植物病毒检测方法有可见症状鉴定、寄生鉴别、抗血清检测、电镜检测、分子检测等。

可见症状鉴定法较简单，但准确性差，对于不表现可见症状的隐症病毒几乎无效；而电镜检测、分子检测虽然检测准确率高，但设备昂贵，尤其电镜不可能每个组培室都配备，故未在生产上广泛运用；目前生产上，国内外仍主要采用鉴别寄主的酶联免疫检测法检测植物病毒。?

8、组培苗生长环境有何特点？如何针对这些特点提高移栽成活率？

组培苗炼苗是组培过程中较为重要的一个环节，是一个较为复杂的技术体系，提高炼苗成活率是决定组培成败和降低组培成本的关键。

试管苗一般在高湿（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒温（25℃）下培养，生长的植株有以下几个特点：（1）、叶片无保护组织（角质层、蜡质、表皮毛等），加之细胞间隙大，气孔开张大，因此水分散失较快，易于萎蔫。(2)、根无根毛或极少，并且有些从愈伤组织上发育的根与芽的疏导组织不相同，因此吸水能力较弱。而当炼苗移栽时，环境有了极大的改变：湿度降低、光照增强、温度升高、温差变大。

具有以上特点的组培苗，在此环境下，叶片失水较严重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸腾水量，从而造成植物萎蔫，炼苗失败。另一种情况是，空气温度上升要比基质温度上升快，而根系的吸水能力在一定范围内与温度是成正比的，当气温升高时，加之湿度较低，叶片蒸腾急速增加，此时基质温度上不去，根系吸水能力不够，造成蒸腾大于吸水的失衡状态，从而萎蔫死亡。

要想获得高的炼苗成活率就得针对以上问题，一方面提高出瓶苗的质量，提高其抗逆性，生根前的壮苗、理想的生根配方和生根培养环境的调控是关键；另一方面就得有针对组培苗特点创造一个适宜的炼苗环境，比如保证空气湿度，平衡空气和基质的温度平衡关系等。?

9、有些植物在组培生根阶段会把大量元素和糖减半，根据什么来判断是否需要减半？

在组培过程中，我们提起配方往往只局限于激素的配比和添加物的使用，其实对基本培养基的构成和培养条件（温度、光照、湿度、PH等）都属于配方的范畴。在这方面的调整主要是根据实际培养状况灵活调整。在生根阶段，试验证明培养基高渗透势或液体培养基有利于营养素和激素的运转，有利于根的发生和形成，因此大部分植物在生根过程需要调整基本培养基