DB32T 2583-2013 饲料中饲用芽孢杆菌的测定.docxVIP

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备案号：40469-2014

DB32

江苏省地方标准

DB32/T2583-2013

饲料中饲用芽孢杆菌的测定

DeterminationofBacillusinfeed

2013-12-20发布2014-01-20实施江苏省质量技术监督局发布

DB32/T2583-2013

前言

本标准编写按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。本标准由江苏省农业科学院提出。

本标准由江苏省农业科学院畜牧研究所、江苏省动物卫生监督所负责起草。本标准主要起草人为宦海琳、周维仁、闫俊书、白群安。

DB32/T2583-2013

饲料中饲用芽孢杆菌的测定

1范围

本标准规定了饲料中饲用芽孢杆菌的测定方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、预混料、饲料添加剂中饲用芽孢杆菌的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

GB/T4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定(原文中的参考文献)

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

芽孢杆菌bacillus

类能形成芽孢(内生孢子)的杆状细菌的通称。与饲料工业密切相关的芽孢杆菌主要为芽孢杆菌

属(Bacillus)的枯草芽孢杆菌(Bacillussubulis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、凝结芽

孢杆菌(Bacilluscoagulans)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)

和短芽孢杆菌属(Brevilbacillus)的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporus)。

3.2

菌落数aerobicplatecount

饲料检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。

4原理

取一定量检样的稀释液，将其在80℃下加热10min,涂布在NA琼脂内，于36℃条件下培养48

h,菌落计数，算出每g(mL)检样中的芽孢杆菌总数。

5设备和材料

5.1分析天平

感量0.1g,0.1mg。

5.2振荡器

5.3粉碎机

2

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非旋风磨，密闭要好。

5.4恒温水浴锅

5.5恒温培养箱

5.6pH计(精确到±0.1个单位)或精密pH试纸

5.7灭菌锥形瓶

500mL、250mL。

5.8无菌吸管

1mL(具0.01刻度)、10mL(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头。

5.9灭菌试管

18mm×180mm、15mm×150mm。

5.10灭菌玻璃珠

5.11灭菌玻璃或塑料培养皿

5.12玻璃涂布棒

5.13光学显微镜1000倍。

6稀释液、培养基和试剂

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，实验室用水采用蒸馏水或去离子水，或相当纯度的水。

6.10.85%灭菌生理盐水

6.2营养琼脂(NA)培养基

参见附录A中的A.1。

6.3革兰氏染色液

参见附录中的A.2。

6.4二乙酰(V-P)测定培养基和试剂

参见附录中的A.3。

6.5L-阿拉伯糖发酵、D-木糖发酵、D-甘露醇发酵培养基

参见附录中的A.4。

6.6明胶液化培养基

参见附录中的A.5。

6.7淀粉水解培养基

参见附录中的A.6。

6.8丙酸盐利用培养基

参见附录中的A.7。

6.9柠檬酸盐利用培养基

3

DB32/T2583-2013

参见附录中的A.8。

6.10硝酸盐还原培养基和试剂

参见附录中的A.9。

6.117%氯化钠生长培养基

参见附录中的的A.10。

6.12厌氧生长测定培养基

参见附录中的A.11。

7检样的制备

按照GB/T14699.1进行采样，采样工具如铲子、匙、采样器、试管等，应是无菌的。样品送到微生物检验室应尽快检验。

按照GB/T20195进行检样的制备，样品制备后应尽快