人HMGB1-boxA基因克隆及其原核表达载体的表达的开题报告 .pdfVIP

人HMGB1-boxA基因克隆及其原核表达载体的表达的开

题报告

一、项目背景

高移动性族细胞内胚质结合蛋白1（HMGB1）是一种高度保守并广泛存在于真核

生物中的核蛋白，常常被用作细胞核DNA的结构稳定化，参与基因转录和修复等生命

过程。然而，它在细胞外的作用引起了许多研究者的注意，研究表明在创伤性损伤、

炎症和肿瘤等情况下，HMGB1被释放到细胞外，发挥了调节炎症反应、增强免疫功能、

促进细胞增殖等生物学效应。因此，HMGB1成为了一种重要的免疫调节分子。目前，

已经有研究报道在小鼠系统中采用腺病毒载体将HMGB1基因转染到肌肉中，能够刺激

肌肉细胞增殖和修复，这项工作使得将HMGB1基因运用到基因治疗中成为可能。因此，

对HMGB1的研究越来越受到重视。

本项目旨在克隆人类HMGB1-boxA基因，构建原核表达载体，并表达出推测蛋

白酶切片段的重组蛋白，为后续研究奠定基础。

二、研究内容

1.克隆人类HMGB1-boxA基因

从人类基因组组织DNA中扩增出人类HMGB1-boxA基因，进一步纯化并进行酶

切。

2.构建原核表达载体

选用适当的载体，将人类HMGB1-boxA基因插入表达的诱导区域，构建重组质

粒并验证质粒正确性。

3.原核表达及纯化

利用大肠杆菌表达人类HMGB1-boxA蛋白，利用亲和层析纯化筛选出重组蛋白。

4.SDS和Westernblot检测

利用凝胶电泳技术和Westernblot技术检测经SDS和电泳分离后纯化出的

人类HMGB1-boxA蛋白的表达情况和纯度。

三、研究意义

通过克隆人类HMGB1-boxA基因并构建原核表达载体，能够将人类HMGB1-

boxA蛋白在大肠杆菌中表达并高效纯化。此项研究为之后HMGB1-boxA蛋白的进一步

功能研究奠定基础。