《生物化学》第05章酶与其他生物催化剂-教学课件（非AI生成）.ppt

核酶的催化反应也具有米-曼氏动力学行为在底物RNA的含量超过核酶含量时，如果核酶每个茎与底物RNA分子形成6个碱基对，其kcat=1?2min?1，Km=0.02?0.2mmol/L。*核酶对RNA的剪切作用核酶通过与底物RNA的碱基互补形成酶-底物复合物，进而转化成酶-底物过渡态复合物，最后断裂成二个产物。*2.发夹核酶（hairpinribozyme）来自烟草斑纹病毒卫星RNA、I型菊苣黄色花斑病毒发夹核酶催化连接反应活性是剪切反应活性的10倍；相反，锤头核酶催化剪切反应的活性是其连接反应活性的100倍。3.其他小分子核酶肝炎?病毒核酶(hepatitisdeltavirusribozyme)瓦库德卫星核酶(VarkudSatelliteribozyme,VSribozyme)发夹核酶底物（-5~+9与核酶结合）（1~50）*（二）大分子核酶主要有组I内含子、组II内含子和RNA酶P核酶1.组I和组II内含子剪接hnRNA组I内含子（groupIintron）和组II内含子（groupIIintron）发现于细菌和高等植物、真菌和藻类的细胞器中。这些内含子在hnRNA成熟过程中，进行分子内部的自我剪切去除，并将剩余的外显子连接在一起，形成成熟的mRNA。*2.核酸酶P核酶是核酸酶P的RNA亚基核酸酶P是内切核酸酶，催化生成5’成熟的tRNA。细菌核酸酶P的RNA亚基（称核酸酶P核酶，RNasePribozyme）具有催化活性，而碱性的蛋白质部分的作用是稳定阴离子的核酸酶P核酶的构象、帮助核酶与底物的结合。*核酶已鉴定的数量生物来源催化反应的类型组I内含子1000真核生物（细胞核、线粒体、叶绿体）、细菌、噬菌体自身剪接的转酯化作用（3?-OH）组II内含子700真核生物（细胞器）、细菌自身剪接的转酯化作用（3?-OH）类组I内含子6耐格虫属水解（3?-OH）核酸酶P核酶300真核生物（核、细胞器）、原核生物水解（3?-OH）锤头核酶11植物类病毒和卫星RNA；蝾螈自身剪切的转酯化作用（2?,3?-环磷酸）发夹核酶4植物类病毒和卫星RNA自身剪切的转酯化作用（2?,3?-环磷酸）肝炎?病毒核酶2人肝炎?病毒自身剪切的转酯化作用（2?,3?-环磷酸）VS核酶1链孢霉属线粒体自身剪切的转酯化作用（2?,3?-环磷酸）核糖体RNA5000真核生物，原核生物肽转移（肽键）剪接体RNA100真核生物反式剪接的转酯化作用（3?-OH）已发现的自然界存在的核酶及其功能*二、脱氧核酶是人工合成的具有催化活性的DNA许多实验室已经合成出一些具有催化活性的DNA分子被称为脱氧核酶（deoxyribozymes）。主要作用：（1）剪切RNA分子（2）剪切DNA分子（3）催化核酸分子磷酸化（4）连接DNA分子（5）催化卟啉与金属离子结合*10-23和8-17脱氧核酶的二级结构与酶切位点脱氧核酶的构成中含有催化核心和2个底物结合臂，均需二价阳离子（如Mg2+）参与。8-17特异地剪切AG和GG之间的磷酸二酯键；而10-23则可剪切任何嘌呤-嘧啶之间的磷酸二酯键。*三、核酶和脱氧核酶是基因靶向治疗的良好工具（一）核酶和脱氧核酶应用于抗病毒基因治疗人工设计的核酶和脱氧核酶可将RNA病毒的基因组作为其剪切的底物，予以破坏。针对病毒的启动子区域、剪接信号序列或包装信号序列等病毒的保守序列，设计直接剪切这些序列的核酶和脱氧核酶，有效地对抗各种病毒亚型，降低逃逸突变的可能性。*（二）核酶和脱氧核酶可用于肿瘤基因治疗很多肿瘤起因于体细胞基因功能获得性和功能缺失性变化（变异）。癌基因的不适当激活可因DNA病毒或反转录病毒感染引起（转化），也可因基因易位引起，基因易位有时还会产生嵌合基因。抑制癌基因或嵌合基因的表达是当前实施肿瘤基因治疗的策略之一。核酶和脱氧核酶是值得探讨的策略，因为这种策略理论上可抑制肿瘤细胞而不影响正常细胞。*第七节酶的研究与应用ResearchandApplicationofEnzymes*一、酶与疾病的发生、临床诊断与治疗密切相关（一）许多疾病与酶的质和量的异常相关1．酶的先天性缺陷是先天性疾病的重要病因之一酪氨酸酶缺乏引起白化病；苯丙氨酸羟化酶缺乏引起苯丙酮酸尿症。2．酶活性改变可引起疾病胰腺炎因胰蛋白酶在胰腺中被激活。3．一些疾病可以引起酶活性的改变严重肝病时可因肝合成的凝血