流式细胞术在肿瘤学中的应用课件.ppt

树突状细胞流式分析阴性表达抗原设门Lin(CD3,14,19,20,56)/HLADR组合DC:Lin-/HLADR+DC亚群分析骨髓DC:CD11c+外周血DC:CD123+(IL3Ra)阳性表达抗原设门CD85k(ILT3)阳性设门仅在单核巨噬细胞及DC细胞表达比HLADR表达更具特异性避免阴性设门DifferentiationofDCsubsets:外周血DC:CD123+(IL3Ra)骨髓DC:CD33+ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD33-PC5CD33-PC5骨髓DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD33ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD123-PC5CD123-PC5外周血DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD123生物免疫治疗CIK细胞(cytokine-inducedkiller)是一群以CD3+T细胞为主的异质性细胞群体，包括CD3+CD56-、CD3-CD56+及CD3+CD56+三种亚群,主要效应细胞为CD3+CD56+细胞。CIK细胞来源于外周血中的CD4-CD8+及CD4-CD8-T细胞。因其同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤特点，是目前所知杀伤活性最强的一种免疫效应细胞。0102CIK细胞治疗过程的评价治疗前病人免疫状况评价T亚群、NK、CIK、细胞因子是否适合做、能否能培养、值得做CIK采集MNCMNC数目、纯度、T亚群、NK、CIK数目及比例是否达到培养要求、调节细胞数MNC数目、T亚群、NK、CIK数目及比例、CD3、CD8活化状况培养培养是否达标、回输时机回输后T亚群、NK、CIK、细胞因子疗效评价、监测、下次治疗的时机CIK治疗程序FCM检测项目意义免疫功能六项：CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK、CIK01Th1/Th2细胞因子02评价的项目CIK治疗前患者的免疫功能评价FCM检测的方法01免疫功能六项试剂：CD45/CD4/CD8/CD3、CD3/CD56/CD4501标本类型：外周抗凝血评价的指标：CD3%、CD4%、CD8%、NK%、CIK%（也可以做绝对计数）01CIK治疗的适应症：除外T细胞相关肿瘤、有可见包块01是否适合做02能否培养03值不值得做04评价的意义根据产生的细胞因子的类型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2Ｔｈ1细胞产生ＩＬ2、ＩＬ12、ＩＦＮγ、ＴＮＦβ等细胞因子,主要参与细胞介导的免疫反应、迟发性过敏反应,并在清除病毒等细胞内致病因子方面起着重要作用Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ4、ＩＬ5、ＩＬ6、ＩＬ10、ＩＬ13等细胞因子,主要促进体液免疫反应,中和胞外病原体相应地，CD8+T细胞也可以分为Tc1和Tc2************流式细胞术在肿瘤学中的应用内容流式细胞仪概念、原理及应用流式细胞术优势流式细胞术在肿瘤学中的应用流式细胞术流式细胞术（FlowCytometry）是利用流式细胞仪检测细胞或其它颗粒性物质的物理、化学特性。同时利用荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段。流式细胞仪检测流程01高速测定细胞，大样本计数03多参数分析02检测稀有细胞流式细胞术优势（分析型）FC500流式细胞仪流式细胞术的应用检测特性：大小、颗粒度、细胞受体/分子、核酸(DNA/RNA)、蛋白……肿瘤免疫01肿瘤细胞周期和凋亡02肿瘤干细胞的研究03血液中循环肿瘤细胞的研究04肿瘤学中的应用肿瘤免疫学天然免疫中性粒细胞嗜酸性细胞嗜碱性细胞单核细胞/巨噬细胞树突细胞:mDC-pDCNK细胞NKT细胞??T淋巴细胞CD5+B细胞获得性免疫B细胞辅助性T细胞 Th1 Th2细胞毒T细胞调节性T细胞淋巴细胞免疫分型B细胞：CD19+T细胞：CD3+CD4+(Th，Treg)CD8+(Tc)NK细胞：CD3-CD56+肿瘤细胞免疫特点CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正