《传染病突发公共卫生事件应急处置技术规范 第10部分：病毒类应急检测技术》.docx

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CCS

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江苏省地方标准

DB32/TFORMTEXTXXXX—FORMTEXTXXXX

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FORMTEXT传染病突发公共卫生事件应急处置技术规范第10部分：病毒类应急检测技术

FORMTEXTTechnicalspecificationforemergencyresponseofpublichealthemergenteventcausedbyinfectiousdisease

Part10：Emergencydetectionmethodofpathogenicinviralinfectiousdisease

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FORMTEXT（本草案完成时间：2024）

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FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

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江苏省市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DB32/TXXXX—XXXX

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传染病突发公共卫生事件应急处置技术规范

第10部分：病毒类应急检测技术

范围

本文件规定了传染病突发公共卫生事件应急处置中病毒类应急检测的生物安全要求、准备工作和质量控制、分子生物学应急检测技术和免疫学应急检测技术等。

本文件适用于传染病突发公共卫生事件应急处置中病毒类传染病病原体的应急检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

WS233病原微生物实验室生物安全通用准则

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

高通量测序high-throughputsequencing

又称下一代测序技术（Next-generationsequencing,NGS），或大规模平行测序（Massivelyparallelsequencing，MPS）。区别于传统Sanger（双脱氧法）测序，能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术，通常一次测序反应能产出不低于100兆的测序数据。

生物安全要求

实验人员应根据GB19489和风险评估的要求，配备不同类型传染病感染的个人防护装备，包括但不限于防护服、手套、外科口罩或医用防护口罩、防护面屏、防护帽。防护服宜每隔4h更换一次。在发生意外暴露时，根据应急处置预案采取必要措施。

实验人员、实验场所、感染性标本处置及消毒灭菌等应符合WS233中的实验室生物安全管理要求。

依据《医疗废物管理条例》规定处置医疗废物。

准备工作和质量控制

准备工作

根据实验需要，准备相应的生物安全柜、移液器、漩涡震荡仪、离心机等仪器和检测试剂耗材。

标本震荡后瞬时离心取上清用于病毒类核酸提取及抗原检测。

按照病毒RNA/DNA核酸提取试剂盒说明书，取适量标本进行核酸提取，提取完成后应立即封盖并马上进行分子生物学检测。剩余的标本和核酸应于-80℃条件下冻存。

质量控制

每一批次反应过程中应至少设置一个阴性和阳性对照，必要时增加空白对照。

测序过程中数据Q30（用于衡量高通量测序中碱基准确度的指标，测序数据中碱基识别质量值为30，表示其碱基识别准确率为99.9%）应≧80%。

宏基因组测序提取的核酸中DNA的A260/A280值应1.8，RNA的A260/A280值应≧2.0。背景核酸模型应每个月更新1次。

分子生物学应急检测技术

实时荧光PCR技术（Real-timePCR）

反应体系配制（PCR反应液、酶、引物、探针及模板）及反应程序设置（反应温度、循环数及荧光通道）应参照相应病毒核酸检测试剂盒说明书。

阴性对照、阳性对照、内参（如有）结果成立时，进行结果判断。阴性显示无Ct值、无S形扩增曲线，阳性显示Ct值小于或等于病毒核酸检测试剂盒说明书规定值，且有S形扩增曲线。

等温扩增技术

将核酸模板（RNA病毒先进行反转录合成第一条cDNA链）或标本上清、引物、DNA合成酶、基质等共同置于商品化试剂盒指定温度下，经一个步骤即可完成。

当阴性对照、阳性对照结果成立时，应使用以下方法进行结果判定：

浊度检测：肉眼观察反应管内出现白色浑浊判定为阳性，未浑浊判为阴性；

荧光检测：加入荧光指示剂后，根据试剂盒说明