《传染病突发公共卫生事件应急处置技术规范 第11部分：细菌类应急检测技术》.docx

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CCS

FORMTEXTC50

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FORMTEXT江苏省地方标准

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FORMTEXT传染病突发公共卫生事件应急处置技术规范第11部分：细菌类应急检测技术

技术

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Part11：Emergencydetectionmethodsofpathogenicbacterium

FORMDROPDOWN

FORMTEXT（本草案完成时间：2024年）

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT江苏省市场监督管理局??发布

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传染病突发公共卫生事件应急处置技术规范

第11部分：细菌类应急检测技术

范围

本文件规定了细菌类应急检测的实验室生物安全要求、准备工作和质量控制、常用显微镜检查技术、分离培养、分子生物学应急检测技术和免疫学应急检测技术等。

本文件适用于传染病突发公共卫生事件应急处置中细菌类传染病病原体的应急检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

WS233病原微生物实验室生物安全通用准则

WS288肺结核诊断

《人间传染的病原微生物目录（2023版）》国家卫生健康委员会

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

致病菌pathogenicbacterium

能引起人类疾病的细菌,统称为致病菌或病原菌。

高通量测序high-throughputsequencing

又称“下一代”测序技术（Next-generationsequencingtechnology），一种大规模并行测序技术。该技术可在较短时间内确定目标区域中核苷酸的顺序，用于细菌全基组或病原宏基因测序。

实验室生物安全要求

实验人员应根据GB19489和风险评估的要求，配备不同类型传染病感染的个人防护装备，包括但不限于防护服、手套、外科口罩或医用防护口罩、防护面屏、防护帽。防护服宜每隔4h更换一次。在发生意外暴露时，根据应急处置预案采取必要措施。

实验人员、实验场所、感染性标本处置及消毒灭菌等应符合WS233中的实验室生物安全管理要求。

医疗废物处置应按照《医疗废物管理条例》规定执行。

准备工作和质量控制

准备工作

根据实验需要，选择相应的生物安全柜、移液器、漩涡震荡仪、离心机等仪器和检测试剂耗材。

质量控制

每一批次反应过程中应至少设置一个阴性和阳性对照，必要时增加空白对照。

常用显微镜检查技术

生理盐水湿片镜下检测

在玻片上滴加适量生理盐水，将适量样本与生理盐水混合并涂抹均匀后，观察中性粒细胞、红细胞及其数量；观察标本中细菌动力特征（用暗视野显微镜观察）等。

革兰氏染色显微镜检查

直接在玻片上涂抹标本，涂片应薄且均匀。自然干燥或恒温干燥器上干燥后，经甲醇固定或火焰快速固定3次，革兰染色，晾干后读片。

革兰染色脱色时间因选用不同的脱色剂而异。使用革兰氏染色仪染色，应按照厂家操作说明书进行。

抗酸染色显微镜检查

抗酸染色镜检操作流程应按照WS288执行。

荧光染色显微镜检查

荧光染色镜检步骤如下。

染色：涂片经火焰固定后，滴加金胺“O”染色剂盖满玻片，染色30min，流水自玻片一端轻缓冲洗，洗去染色液，沥去玻片上剩余的水；

脱色：涂膜上端外缘滴加脱色剂，盖满玻片，脱色3min或至无色，流水自玻片一端轻洗，洗去脱色剂；

复染：加复染剂复染1min，沥去复染液，流水自玻片一端轻洗，自然干燥后镜检；

镜检：玻片涂膜面向上置于荧光或LED显微镜载物台，并以卡尺固定后，以低倍镜搜索发现疑为致病菌的荧光物质，使用40×物镜确认。在暗背景下，目标菌发出荧光，呈特征形态。

其他特殊染色显微镜检查

细菌特殊结