DB43T 985-2015 辣椒花药培养技术规程　.docxVIP

ICS65.020.20B05

DB43

湖南省地方标准

DB43/T985—2015

辣椒花药培养技术规程

Technicalrulesofanthercultureforpepper

2015-01-23发布2015-03-23实施

湖南省质量技术监督局发布

I

DB43/T985—2015

目次

前言 Ⅱ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语与定义 1

3.1花药培养 1

3.2单核靠边期 1

3.3胚状体 1

3.4单倍体 1

4试剂 1

5仪器和设备 2

6培养基配制与灭菌 2

7炼苗基质配制与灭菌 2

8花药培养技术流程 2

8.1花蕾采集 2

8.2花蕾处理 2

8.3花蕾消毒 3

8.4花药接种 3

8.5花药培养 3

8.6胚状体分化成苗 3

8.7组培苗炼苗与移栽 3

8.8组培苗倍性鉴定 3

附录A（规范性附录）辣椒花药培养档案记载表 4

II

DB43/T985—2015

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由湖南省蔬菜研究所提出。

本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：湖南省蔬菜研究所。

本标准主要起草人：杨博智、周书栋、王利群、欧立军、邹学校、戴雄泽、马艳青、李雪峰、张竹青、陈文超，梁成亮。

1

DB43/T985—2015

辣椒花药培养技术规程

1范围

本标准规定了辣椒花药培养技术流程。本标准适用于辣椒花药培养。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008中国国家实验室分析用超纯水标准

3术语与定义

下列术语与定义适用于本标准。

3.1花药培养

指采用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术接种在人工培养基上，以改变花药内花粉粒的发育程序诱导其分化，并连续进行有丝分裂形成细胞团，进而形成一团无分化的薄壁组织----愈伤组织，或分化成胚状体，形成完整的植株的一种培养方式。

3.2单核靠边期

指四分体的胼胝质壁完全溶解后，中央大液泡开始形成，将细胞核从中心挤压到靠近细胞壁时所处的时期，此时花蕾形态特征为花瓣微露出花萼或与花萼齐平。

3.3胚状体

指辣椒花粉粒（小孢子）经过雄核发育成为多细胞花粉后，细胞数目进一步增加，花粉外壁膨大，冲破花粉壁，形成的多细胞团。胚状体按生长阶段分为原胚、心形胚、鱼雷形胚和成熟胚。

3.4单倍体

体细胞中含有本物种配子的染色体数目的个体。

4试剂

4.1超纯水

应符合GB/T6682中规定的三级超纯水。

4.2试剂

DB43/T985—2015

2

消毒试剂：酒精次氯酸钠；

消毒试剂：酒精次氯酸钠；

、

、

无机试剂：硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硼酸、四水硫酸锰、七水硫酸锌、三氧化钼、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、硫酸亚铁、EDTA二钠盐；

有机试剂：肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、叶酸、生物素、核糖核酸酵母、谷氨酰胺、丝氨酸、脯氨酸；

生长调节剂：a-萘乙酸、激动素；

其它试剂：硝酸银、秋水仙碱、琼脂粉、活性炭和蔗糖。所有试剂等级均为分析纯。

5仪器设备

超纯水仪、电子分析天平（精确度：0.0001g）、pH计（或pH试纸）、刻度容量瓶、移液管、恒温培养箱（温度范围：5～65℃)、电磁炉、超净工作台、高压灭菌锅、电热恒温干燥箱（温度范围：5~300℃)。

6培养基配制与灭菌

花药培养基成分为：每升培养基中含有720mg硝酸铵、950mg硝酸钾、166mg氯化钙、185mg七水硫酸镁、68mg磷酸二氢钾、10mg硼酸、25mg四水硫酸锰、10mg七水硫酸锌、0.25mg三氧化钼、0.025mg硫酸铜、0.025mg氯化钴、27.8mg硫酸亚铁、37.8mgEDTA二钠盐、100mg肌醇、5mg烟酸、0.5mg盐酸吡哆醇、0.5mg盐酸硫胺素、2mg