发酵度(水解度)指标测定.pdf

水解度的测定

方法一：(茚三酮比色法)

（1）标准曲线制定：

1、20μg／ml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。

2、茚三酮显示剂：水合茚三酮0.5g，果糖0.3g，磷酸氢二钠11.2g，磷酸二氢钾6g,定

容到100ml.稍热溶解，避过低温保存1周。

3、40%乙醇

标准曲线制作

试管012345678待测

样品

标液ml0.000.10.20.30.40.50.60.71.00.5

蒸馏水ml2.001.901.801.701.601.501.401.301.001.5

茚三酮显示1111111111

剂ml

摇匀，沸水浴15min，用冷水迅速冷却至室温

40%乙醇ml5555555555

甘氨酸μg0246810121420??

OD(570nm)

N水解液蛋白含量（凯氏定氮）

F米糠蛋白换算系数5.95

方法二：采用甲醛滴定法。

水解度（%）=（水解后生成的氨基氮的量/样品中总氮含量）×100%

（1）粗蛋白含量的测定：采用凯氏定氮法。

（2）氨基氮的测定

氨基酸含有氨基和羧基，具有两性，加入甲醛与氨基酸中的氨基作用，可消除其

碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定，即可对氨基酸进行定量。

1、酚酞指示剂：0.5g酚酞溶于100ml50%的乙醇中

2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（36~37%，分析纯）50ml，加入0.5%的酚酞指示

剂约3ml，滴加0.1mol／LNaOH，使溶液显微粉色，储存于棕色瓶中，临用前配

制。

具体方法如下：

分别吸取2mL不同水解度的水解液于烧杯中加蒸馏水5mL，向烧杯中加入5滴

酚酞指示剂，混合后加中性甲醛溶液2.0ml再混合，用0.1mol／LNaOH滴定显

微粉色。同时取同浓度但未水解的蛋白液2mL做空白实验。

式中：

V—样品耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；

V0—空白耗用氢氧化钠标准溶液毫升数；

N—氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；

14.008—1mL浓度为1.000mol/L氢氧化钠标准溶液相当于氮的质量（mg）。

方法三：

氮溶指数测定（TCA-NSI)

可以通过检测其氮溶解指数来初步判定小肽或寡肽含量。

NSI（％）＝（N1/N0）*100

N0＝总氮

N1＝可溶性氮（用三氯乙酸――可溶性氮测定法）

三氯乙酸（TCA）是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉淀蛋白质和较长的肽

段。可以被三氯乙酸沉淀的肽段所含的最少氨基酸残基数与底物的种类

有关，就特定的底物而言，三氯乙酸氮溶解指数可以定性反映蛋白质的

分解情况，溶解指数越高，表明较短肽段含量越高。

三氯乙酸氮溶指数（TCA－NSI）测定方法：

将20ml10％三氯乙酸（TCA）溶液添加到20ml待测混合液（混合液

浓度为10％），混合液震荡，静置10分钟，在4000转/分下离心