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人教版生物选修三基因工程知识点及习题

专题1基因工程

基因工程的概念

基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性

,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品.基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做

DNA重组技术。

（一）基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”—-限制性核酸内切酶（限制酶)

(1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的.

（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二

酯键断开，因此具有专一性。

（3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

2.“分子缝合针”——DNA连接酶

(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和TDNA连接酶）的比较:

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①相同点:都缝合磷酸二酯键.

②区别：E·coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起

来;而TDNA连接酶来源于T噬菌体，能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。

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(2)与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。

DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

3。“分子运输车—-载体

（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

（2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状

DNA分子。

（3）其它载体：入噬菌体的衍生物、动植物病毒

(二)基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取

1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。

2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_.

3.PCR技术扩增目的基因

（1)原理：DNA双链复制

（2)过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链;第三步：加热至7

0～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

第二步：基因表达载体的构建

1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

2。组成:目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因

(1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录

出mRNA，最终获得所需的蛋白质.

（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。

（3）标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标

记基因是抗生素基因.

第三步：将目的基因导入受体细胞_

1.转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2。常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等.

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵.

将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常用的原

核细胞是大肠杆菌，其转化方法是:先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于

缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程.

3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。

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