动物疫病鉴别检测技术 第3部分：禽腺病毒Ⅰ群与禽腺病毒Ⅲ群_地方标准编制说明.docx

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《动物疫病鉴别检测技术第3部分：禽腺病毒Ⅰ群与禽腺病毒Ⅲ群》

地方标准编制说明

（报批稿）

一、工作简况

（一）任务来源

2019年9月4日，山东省市场监督管理局发布《2019年度标准化综合改革暨“山东标准”建设计划项目》（鲁标改办发〔2019〕6号），本标准任务来源于其中的“乡村振兴标准化建设项目”，名称为“Ⅰ群禽腺病毒通用PCR检测方法”，由山东省畜牧兽医局提出并组织实施、山东省畜牧业标准化技术委员会归口，山东省滨州畜牧兽医研究院牵头组织编制。

（二）起草单位、起草人及任务分工

本标准起草工作由山东省滨州畜牧兽医研究院、山东绿都生物科技有限公司承担。本标准制定首先成立了标准起草小组，拟定了标准起草工作方案、技术路线、人员分工和计划进度等，具体人员分工如下。

姓名

单位

职称

承担任务

肖跃强

山东省滨州畜牧兽医研究院

研究员

标准制订负责人，项目设计、统筹协调、标准

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起草与修改审定

沈志强

山东省滨州畜牧兽医研究院

研究员

技术与标准起草指导

于雪

山东绿都生物科技有限公司

助理研究员

标准品制备、检测方法验证

杨慧

山东绿都生物科技有限公司

助理研究员

敏感性检测

王金良

山东省滨州畜牧兽医研究院

研究员

特异性检测

魏凤

山东省滨州畜牧兽医研究院

副研究员

病毒分离鉴定

刘吉山

山东省滨州畜牧兽医研究院

研究员

临床诊断及样本采集

李书光

山东省滨州畜牧兽医研究院

副研究员

样本采集

郭广君

山东省滨州畜牧兽医研究院

副研究员

动物实验

（三）起草过程

1、材料收集

2019年检索和查阅国内外相关文献资料，搜集了相关畜禽疫病诊断的国家标准、行业标准、地方标准及团体标准等，根据禽腺病毒Ⅰ群主要血清型毒株、禽腺病毒Ⅲ群唯一成员减蛋综合征病毒（eggdropsyndromevirus,EDSV）流行情况以及基因组序列差异性的特点，分析比较了现有动物疫病检测方法的优、缺点，确定了聚合酶链式反应（PCR）是适合实验室的检测方法。

2、病原与流行病学调查

禽腺病毒Ⅰ群分为A（FAdV-1）、B（FAdV-5）、C（FAdV-4、

10）、D（FAdV-2、3、9、11）、E（FAdV-6、7、8a、8b）共5个种12个血清型，自然宿主广泛，可以感染鸡、火鸡、

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鸭、鹅、鸽子以及珍珠鸡、雉鸡、鹦鹉、鸵鸟等野生禽类，引起鸡、鸭、鹅等多种家禽或野禽的典型临床症状，包括心包积水综合征、包涵体肝炎、坏死性胰腺炎和肌胃糜烂症以及呼吸道疾病等病症。禽腺病毒Ⅰ群12个血清型成员绝大部分均能够引起包涵体肝炎。Ⅲ群唯一成员EDSV和Ⅰ群具有部分相同群抗原，被列为严重危害养鸡业的4种主要病毒性传染病之一，其易感宿主包括鸡、鸭和鹅等。本项目组自2014年禽腺病毒Ⅰ群引起的疫病暴发以来，对其临床症状、流行病学、临床发病特点、病毒遗传进化演变、综合防控技术等进行了深入研究，发现，不同品种不同日龄的鸡均能发病，死亡率因血清型不同或者毒力差异而存在较大差异，最高达80%，对养禽业造成了严重损失。项目组自肉鸡、蛋鸡、樱桃谷鸭、麻鸭等病死禽分离获得70余株禽腺病毒Ⅰ群，并就部分毒株的生物学特性、致病特性、主要结构蛋白Hexon基因序列、DNA聚合酶基因及部分毒株基因组进行了研究分析，参考文献报道方法进行病毒血清型分型，同时，结合国内相关研究报道，发现国内目前流行毒株主要有FAdV-1、FAdV-4、FAdV-8a、FAdV-8b及FAdV-11等血清型。因此，建立一种可以通用检测Ⅰ群的PCR检测方法并实施标准化非常重要，对于开展该群病毒的诊断起到重要作用。同时，我国养禽业主要包括鸡、鸭、鹅、鸽子等，禽腺病毒Ⅰ群和Ⅲ群易感宿主均包括鸡、鸭、鹅等禽类，是影响我国养禽业健康发展的重要病原，且二者具有部分相同群抗原，因此，有必

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要针对Ⅰ群、Ⅲ群开展鉴别检测，对防控禽腺病毒感染具有重要意义。

3、检测方法建立与复核

下载GenBank中登录的禽腺病毒Ⅰ群5个种共45株病毒DNA聚合酶、20株病毒100K蛋白基因序列，比对分析后选择DNA聚合酶、100K蛋白基因保守区域分别设计了3对、1对PCR检测引物，经敏感性、特异性和重复性等验证，从中筛选出1对以DNA聚合酶基因为靶标的检测引物，对反应条件进行了优化，建立了一种可通用检测禽腺病毒Ⅰ群的敏感、特异、快速的PCR检测方法，并进行了临床样品的应用检测验证，确保方法的准确性。同时，针对