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水产品中乙酰甲喹残留量的测定液相色谱法

1范围

本标准规定了水产品中乙酰甲喹残留量的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于水产品中乙酰甲喹残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

样品用二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶液提取，正己烷去脂，用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。

4试剂和材料

4.1所用试剂除另有规定外，均为分析纯。

4.2试剂和材料主要包括：

——试验用水：应符合GB/T6682中一级水的规定；

——二氯甲烷；

——乙酸乙酯；

——甲醇：色谱纯；

——正己烷；

——二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液：二氯甲烷体积分数为75﹪;

——乙酰甲喹标准品：纯度≥99﹪;

——乙酰甲喹标准贮备溶液：准确称取0.01g（精确至0.0001g）乙酰甲喹，用甲醇溶解并定容

至100mL，配成浓度为100μg/mL的标准贮备液，置4℃冰箱保存，保存期不超过3个月；

——乙酰甲喹标准工作液：取乙酰甲喹标准贮备液，用流动相稀释成浓度范围为0.05μg/mL～1

μg/mL的标准工作液。

5仪器和设备

主要包括：

——高效液相色谱仪，配有紫外检测器；

——旋转蒸发仪；

——离心机：7000r/min；

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——分析天平：感量0.00001g；

——天平：感量0.01g；

——超声波清洗器；

——旋涡混合器；

——具塞玻璃离心管：10mL；

——100mL梨形瓶；

——50mL塑料离心管；

——微孔滤膜：有机系，0.45μm。

6试样测定

6.1样品的制备

虾类去头、壳、肠线，贝类、蟹类去壳，鱼类去骨、内脏。取可食部分用高速分散匀质机匀浆，备用。如不能及时检测，-18℃以下冷冻保存备用。

6.2样品的提取

称取匀浆后的样品5g（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加20mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液，振摇混匀，超声提取15min，4000r/min离心10min，将提取液移至100mL梨形瓶中，残渣用15mL二氯甲烷-乙酸乙酯混合提取液重复提取1次，合并上清液于上述梨形瓶中，40℃旋转蒸发至近干。

6.3样品的净化

向蒸发至近干的梨形瓶中加入1.00mL流动相，漩涡溶解残渣，转移至10mL具塞离心管中，加入5mL正己烷，漩涡混合1min，4000r/min离心10min，弃去上层正己烷，下层溶液过0.45μm微孔滤膜后，供液相色谱分析。

6.4测定

6.4.1色谱条件

主要包括以下几项：

a)色谱柱：MGC18柱,250mm×4.6mm（i.d.），5μm；或性能相当者；

b)流动相：甲醇-水（甲醇体积分数为50﹪);

c)流速：0.8mL/min；

d)检测波长：373nm；

e)柱温：30℃;

f)进样量：20μL。

6.4.2标准曲线绘制

取乙酰甲喹标准贮备液，用流动相稀释成适当浓度的系列标准工作液。分别取20μL进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算线性方程。

6.4.3液相色谱测定

在6.4.1色谱条件下对样品溶液进行测定，响应值应在仪器检测线性范围内。标准品保留时间参考值为：5.632min(见附录A)。

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7空白试验

除不加试样外，均按6进行测定。

8结果计算

试样中乙酰甲喹残留量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值，结果保留三位有效数字。

X=×1000....................................(1)

式中：

X——试样中乙酰甲喹残留量，μg/kg；

C——试样溶液中乙酰甲喹的浓度，μg/mL；

V——试样溶液最终体积，mL；

M——试样质量，g。

9灵敏度

本方法检出限为10μg/kg；定量限为20μg/kg。

10准确度

本方法添加浓度为20μg/kg～200μg/kg时，回收率为70﹪~90﹪。

11精密度

批内相对标准偏差≤10﹪,批间相对标准偏差≤15﹪。

12方法的线性范围

本方法的线性范围为50μg/L～1000μg/L。

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5.632

5.632

乙酰甲喹-5.622

附录A

（资料性附录）

色谱图

图A.1200μg/L乙酰甲喹标准溶液色谱图

图A.2鲤鱼空白色谱图

图A.3