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RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋

白基因cipA和cipB

基因组学与应用生物学,2009年,第28卷,第3期,第417—421页

GenomicsandAppliedBiology,2009,Vo1.28,No.3,417—421

研究报告

ResearchReport

RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cj!;

唐志如张友明孙志洪黄瑞林印遇龙

中国科学院亚热带农业生态研究所,长沙,410125

通讯作者,*******************

摘要RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cA和cB,为发光光状杆菌

基因敲除提供方

法.采用TOPO克隆方法将基因c/pa和c/pB克隆到质粒pTA上,获得质粒pTA.cipA

和pTA.cipB;采用

Red/ET方法分别将Gentd基因和Aprar基因分别插入pTA.cipA和pTA.cipB的

cA和cipB基因中,并替

换cipA和c基因部分序列,获得pTA—GentalncipA和

pTA.ApralncipB;pTA-GentalncipA通过BamHI酶

切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得GentalncipA,将GentalncipA导入带有质粒

pASK-otl3~/A的luminescens

subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA;pTA—

ApralncipB用EcoRI酶

切,从0.7%琼脂糖胶上回收获得ApralncipB,将ApralncipB导入带有质粒

pASK-ct[3,yA的Pluminescens

subsp.Akhurstii中,通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB;42~C

下热激去除突变菌中的质

粒pASK-ett3~/A.克隆PCR和SDS.PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基

因cA和cipB均被敲

除.采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB.

关键词发光光状杆菌,RED同源重组,敲除,晶体蛋白

KnockoutoftheCrystallineInclusionProteinGenecandein.一

torhat~dusluminescensbyREDHomologousRecombination

TangZhiruZhangYoumingSunZhihongHuangRuilinYinYulong

InstituteofSubtropicalAgriculture,ChineseAcademyofSciences,Changsha,410125

Correspondingauthor,*******************

DOI:10.3969/gab.028.000417

AbstractStudyontheknockoutofthecrystallineinclusionproteingenecipaandc日

inPhotorhabdusZumi—

nescenssubsp.AkhurstiibyREDhomologousrecombinationprovideageneknockoutmeth

odforPluminescens

subsp.Akhurstii.pTA-cipAandpTA—

cipBwereacqu~edviacipAandcipBamplifiedfromluminescenssubsp.

AkhurstiigenomeDNAandclonedonpTAbyTOPOCloning;pTA-?GentarlnCipAorpTA

—?AprarlnCipBwas

gainedviathegentamycineresistantgene(Centd)orapramycinresistantgene(Apra9withtw

ohomologyarmswas

amplifiedandexchangedwithapartofcipAorc咖ofpTA