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但,去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态如:高度分化的神经细胞和心肌细胞已经丧失的增生活性不可能恢复但已经具备的生物电活动特性
不会完全失去可重新表现出分化特点如:01把表皮细胞放在气液界面上培养,可分化成02含大量角蛋白丝的角质细胞03内皮细胞--04但,这种能力会随着培养时间延长05逐渐丧失06总之,休外培养,使细胞07结构与功能上的“可塑性”增大08防止去分化09贴附和铺展01粘附于固相表面是锚定依赖性细胞生命活动的基本要求02细胞被接种到培养器皿内以后03首先要发生粘附(adherence),04是细胞培养以后能否成功的第一步.05细胞悬液后06耽搁得越久,越容易发生退化07提供什么样的生长表面08是细胞能否成功粘附的主要因素。贴附(粘附)和附着如巨噬细胞、成纤维细胞等粘附能力强能在数分钟至数十分钟内粘附到固相表面如神经元细胞、羊水细胞,粘附能力弱需要数小时乃至更长的时间才能粘附到固相表面粘附能力强的细胞---粘附能力弱的细胞---可利用此特点(粘附:快、牢;慢、弱)分离、纯化细胞不同细胞的粘附能力不同细胞形态因是否贴附于底物而不同悬浮的细胞:基本圆形相差显微镜粘附和贴壁的细胞:扁平圆形“亮圈”很快过渡--贴附过程:3步01贴附因子粘附02细胞开始附着03细胞进一步04牢固附着—伸展0501各种细胞不同如接种30’后…第二瓶30’…02(附着最强)巨噬细胞一成纤维细胞03——上皮细胞——血细胞(最弱)04生物因素05血清、培养液中的促附着因子06机械,物理等其他因素因素07离心:促进附着08流动:培养液流动可阻止细胞附着09低温:可抑制附着影响因素措施(因素)1.包被
对分化程度高、生长能力差的细胞
可在培养瓶皿表面包被有利于细胞粘附和
生长的生物活性物质如:--
通过其所带电荷先吸附--,培养的细胞再与其结合。
血清内含有多种能够
促进细胞粘附的成分
细胞本身也可能产生一些粘附分子措施2.减少接种时细胞悬液的量
待细胞粘附和贴壁之后,再补充足够的培养液3.减少培养液中血清的含量
使培养液黏度降低4.培养液中离子成分及其浓度
如,培养液中的Ca含量过低时不利于
细胞的粘附、贴壁和铺展5.培养液的温度
低温会减低细胞的活动,妨碍黏附和贴壁促进细胞粘附的成分铺展(伸展)(spread)01进行生命活动的一种基本的生长特点或生长行为02铺展状况制约细胞的分裂增殖活动03过程,细胞先由圆形变为04圆饼形(放射状铺展细胞)05逐渐铺开伸展成为扁平的极性细胞06极性细胞就是各种有机体细胞07在体外的特征性细胞形态08铺展是调节细胞形状的主要方面铺展得越好,细胞越扁意味着细胞与生长基质表面接触面越大铺展状况与细胞的生长有密切关系只有当细胞铺展到合适的程度DNA合成才开始进行通过比较贴壁依赖性细胞不同铺展程度与DNA合成率之间的关系发现细胞越扁(厚度越小)DNA合成率越高铺展状况01细胞形状(伸展)与细胞的生长03对正常细胞的DNA合成重要02合适的细胞形状-伸展04对其生长重要伸展的意义实验一
成纤维细胞
1.附着于玻璃或塑料底物:细胞增殖
2.悬浮培养:细胞不增殖
3.a.培养在悬浮的玻璃纤维上:
若够长:细胞可增殖
若短于20um,细胞可附着,但增殖很慢
或不增殖
b.在某些塑料上:有些细胞可附着,
但增殖很慢或不增殖伸展的意义伸展至原来的形态,才能增殖因此,细胞形状,至关重要在3.培养中:细胞维持介于扁平与圆球之间在2.悬浮培养中:细胞圆球形,未伸展在1.附着培养物上:细胞很扁平,很伸展DCBAE原因分析伸展的意义-实验伸展的意义-实验二高浓度(厚)低浓度(薄)
细胞
圆扁
(附着最差)
获得细胞构型(模型)
不同伸展程度的细胞PolyHEMA35----------0.0035um01厚厚(21~22um)(伸展差)(10+-2)
薄
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