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紫叶稠李组培快繁技术规程

1范围

本文件规定了紫叶稠李（Padusvirginiana）组织培养快速繁殖技术方法，具体包括外植体的采集与处理、培养基的配制、组织培养程序等技术和要求。

本文件适用于辽宁省范围内紫叶稠李的组培快繁育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6001-1985育苗技术规程LY/T1000-2013容器育苗技术

LY/T1882-2010林木组织培养育苗技术规程NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

紫叶稠李Padusvirginiana

为蔷薇科（Rosaceae）稠李属（Padus）落叶乔木。生物学特性参见附录A。3.2

外植体explant

用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。3.3

母液stocksolution

按照培养基配方将培养基的成分配制成一定浓度和比例的溶液或混合溶液。3.4

初代培养primaryculture

将经灭菌处理的外植体接种于琼脂培养基上，诱导出愈伤组织或芽的培养过程。

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3.5

继代培养subculture

外植体经初代培养后，再次以及以后各次接种于新培养基继续培养的过程。3.6

生根培养rootingculture

诱导无根试管苗产生根的过程。

4外植体采集与处理

4.1外植体采集

外植体的采集一般在6月中旬，选择优良母树当年生茎段作为外植体，采集宜在晴天进行，宜随采

随用，若需长途运输，需将外植体保存在装有冰块放入保鲜盒中。

4.2外植体处理

将采集的外植体枝条进行如下处理：剪除枝条上的叶片，并将其剪成长约2cm～3cm的带腋芽（顶芽）茎段，放入烧杯中用洗衣粉或洗洁精浸泡5min，流水冲洗2h～3h，再用蒸馏水冲洗2次，转至超净工作台上备用。

5培养基配制

5.1MS培养基母液配制

MS培养基母液配制注意如下事项。

a)母液配制使用蒸馏水。

b)配制大量元素母液时，每个组分单独溶解，避免沉淀发生。

c)配制后的母液应置于4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，母液配制后应贴好标

签，注明名称、配制日期并及时使用，贮存时间不宜超过3个月，发现有沉淀或絮状物出现应停止使用。

5.2植物生长调节物剂母液配制

植物生长调节物质母液的配制浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，其配制方法参见附录B。母液配制

好后贴好标签并置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超过3个月。

5.3培养基制作

培养基的制作按LY/T1882中4.2中执行。培养基配制参考用量见附录B。

5.4培养基灭菌

培养基灭菌按LY/T1882中4.2执行

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5.5培养基保存

灭菌后的培养基应注明编号及配制日期，同时按培养基种类、配制先后顺序分别储存于接种室或培养室。存储时间不宜超过2周。

5.6培养基配方

初代培养：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L或MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；继代培养：MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.08mg/L；生根培养：MS+NAA0.5mg/L。

6外植体消毒

在超净工作台上，用0.1%的Hgcl2消毒液浸泡顶芽部分1min～3min，腋芽部分2min～5min，用无菌水冲洗5次~7次，再用无菌滤纸吸干水分后，最后剪成1.5cm~2.5cm的单芽茎段备用。

7培养条件

培养室内温度为25±2℃,光照强度为2000Lx，光照时间为每天12h～16h。

8组织培养

8.1初代培养

将已消毒的外植体接种在初代培养基上，接种操作参照NY/T2306中10.5执行。用记号笔在培养瓶上注明接种日期、编号或名称，放至培养室进行培养。10d～15d后芽开始萌发，20d左右茎尖变绿并伸长生长，茎段腋芽萌发新芽，诱导30d左右可获得1cm～2cm的新芽。

8.2继代培养

将初代培养诱导形成的幼芽或丛生芽，接种到增殖培养基上进行培养。增殖培养周期为30d～40d。

8.3生根培养

选取壮苗高2cm～3cm的幼苗，接种于生根培养基中进行生根培养。

9温室炼苗