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紫叶稠李组培快繁技术规程

1范围

本规程规定了紫叶稠李（Padusvirginiana）组织培养快速繁殖技术的方法，具体包括外植体的采集与处理、培养基的配制、接种、培养条件、试管苗炼苗、试管苗驯化、试管苗移栽、定植。

本标准适用于辽宁省范围内紫叶稠李的组培快繁育苗。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB6000主要造林树种苗木质量分级GB/T6001育苗技术规程

LY/T1000容器育苗技术

DB33/T752-2009植物种苗组培快繁技术规程NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程

3术语和定义

紫叶稠李（Padusvirginiana）为蔷薇科稠李属高大落叶乔木，原产于北美。该树种初生叶为绿色，随着温度升高，逐渐转为紫红绿色至紫红色，秋后变成红色，是观赏价值较高的彩叶树种。生物学特性参见附录A。

下列术语和定义适用于本标准。

3.1外植体

植物组织培养所利用植物离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞以及原生质体，称为外植体。

3.2污染

培养基或培养材料生长有真菌或细菌等微生物的现象。

3.3母液

为称量准确和方便，按照培养基配方将培养基的成分配制成一定浓度和比例的溶液或混合溶液。3.4初代培养

把灭过菌的外植体接种于琼脂培养基上，诱导出愈伤组织或芽的培养过程。

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3.5增值培养

把培养材料周期性的分株，分割后转接入新鲜培养基中继续培养的过程。

3.6增值系数

一个培养周期内试管芽增值倍数，即单芽培养一个周期后的平均增值芽数。3.7生根培养

诱导无根试管苗产生根的过程。

3.8炼苗

组培苗及培养容器一起移至室外近自然环境中培养，提高苗木的木质化程度，增强苗木对自然光照和温湿度变化适应能力的过程。

3.9驯化

炼苗后的组培苗，移栽到驯化基质中，适应自然光照、温差变化而使之成活的过程。

3.10移栽

驯化后的组培苗种植到温室或扦插棚移栽基质中，并逐渐适应自然条件下生长健壮的过程。

4外植体采集与处理

4.1外植体采集

在生长旺盛的季节6月份，选择连续3天以上的晴天，采集优良母树当年生枝条作为外植体。外植体宜当天取材，当天处理，若需长途运输，需将外植体保存至装有冰块的保鲜盒。

4.2外植体处理

将取回的外植体枝条剪去叶片，将其剪成长约2cm～3cm的带顶芽或腋芽的茎段，放入烧杯中用洗衣粉或洗洁精浸泡5min，流水冲洗2h～3h，再用蒸馏水冲洗，然后转至超净工作台上备用。在超净工作台上，用已配制好的75%的乙醇浸泡30s，然后用无菌水冲洗2次～3次。称取1g氯化汞，加蒸馏水溶解后定容至1L，配制成0.1%的升汞消毒液。用其浸泡材料（顶芽1min～3min，带腋芽的茎段2min~5min）后，用无菌水冲洗5次～7次，并用无菌滤纸吸干水分后，剪成1cm～2cm的带顶芽或腋芽的茎段备用。

5培养基配制

5.1MS培养基母液配制

5.1.1制作培养基前需先配制培养基母液，MS培养基母液配制比例参见附录B。

5.1.2母液配制应用蒸馏水。

5.1.3配制大量元素母液时，每个组分单独溶解，避免沉淀发生。

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5.1.4配制后的母液应置于4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过3个月。

5.1.5母液容器上应贴好标签，注明名称、配制日期，发现母液中有沉淀或絮状物出现应停止使用。

5.2植物生长调节物质母液配制

植物生长调节物质母液的配制浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，其配制方法参见附录C。母液配制好后贴好标签并置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超过3个月。

5.3培养基制作

5.3.1准备好培养容器（1L烧杯）、蒸馏水、琼脂粉、蔗糖和各类母液等。

5.3.2先用烧杯盛有少量蒸馏水，参考用量见附录A。

5.3.3按蔗糖浓度30g/L，计算用量，称量后用蒸馏水溶解，然后用容量瓶定容。

5.3.4把称量好的琼脂粉（6g/L～7g/L）加入烧杯中加热搅拌至完全溶解。

5.3.5根据要求加入计算好的激素，玻璃棒搅拌均匀。

5.3.6充分搅拌后，用pH试纸测