玉米芽尖转化研究和GFP基因.pptVIP

本次试验采用玉米芽尖作为转化受体，该转化受体在国内外很少见有报道，在国内处于先进水平，与其他受体相比具有操作简单、转化周期较短等优点。在玉米的遗传转化中常见的受体包括愈伤组织、原生质体、种质、直接分化四种。其中种质受体指转基因利用的受体是植物自身的生殖系统，如花粉粒、卵细胞，也称生殖细胞受体系统，主要从两个途径利用种质受体进行基因转化；直接分化指叶片、幼茎等外植体细胞越过脱分化产生愈伤组织而直接分化出不定芽获得再生植株。报告基因是研究真核(原核)生物中外源基因表达，调控，转染等非常有效的工具。本实验采用的是GPF报告基因，GFP源于多管水母，不需加入任何底物或辅酶，即可在流式细胞仪任、共聚焦扫描激光显微镜、荧光比色仪、荧光显微镜等下检测到绿色荧光。与传统的报告基因相比，GFP的突出优点是对细胞无伤害和便于对活细胞测定。种子消毒切取幼芽并侵染共培养筛选分化生根切根二次生根转化总流程转化过程-1：种子消毒与萌发1挑选健康饱满的种子，发芽率在90%以上。1.3消毒过和种子种植在MS（pH=5.8）上，26℃暗培养2-3天。1.2玉米籽粒用酒精和升汞各灭菌10min，用无菌水洗涤5次转化过程-2：切取芽尖选取发芽势强的种子，切取芽尖约2毫米，不宜超过4毫米。胚芽切点胚根转化的关键步骤！操作员对切点位置的掌握与转化成功率直接相关。注：切芽尖时注意保湿。转化过程-3：侵染3.1培养农杆菌(OD600=0.8-1.2)3.2菌液离心（6000rpm，10min）,用等体积浸染液重浮。3.3将外植体放在重浮液中，26℃，130转/分钟，慢速共培养3小时。010302转化过程-4：共培养CompanyLogologo用无菌滤纸滤干，移植到共培养基上，26℃，暗培养3天。转化过程-4：筛选培养在加有20mg/L潮霉素250mg/L羧苄青霉素的筛选培养基上26℃暗培养7天。注：每皿放置芽尖不可多放，否则容易褐化。转化过程-5：分化培养在分化培养基上3-4轮（7天/轮）光周期（16/8小时）光强120-50mmol/s·m2温度25℃注：每次继代时及时剔除褐化芽，并切除芽下褐化部分。CompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogo消毒装置：分液漏斗中上加浓盐酸，下面为次氯酸钠；中间放置玉米种子瓶；烧杯内为氢氧化钠水溶液待瓶子充满氯气封口后在230r/min摇床上摇三小时，在无菌通风橱（通风橱内放定制的小超净台）放氯气2h。转化的关键步骤！操作员对切点位置的掌握与转化成功率直接相关。筛选条件：不同品种要分别做预实验确定筛选压。每次继代时及时剔除褐化芽，并切除芽下褐化部分。切根为关键步骤，不可切的太过！生出的根要及时观察是否有根毛，对于无吸收能力的根要及时切除，重新生根。玉米芽尖转化研究和GFP基因的转化上海大学生命科学学院报告人：孙臣成概述：CompanyLogo玉米是世界上第三大粮食作物,种植面积仅次于水稻和小麦。中国是世界上第二大玉米生产国。玉米不仅是重要的粮食,而且还是重要的饲料作物,在国民经济中占有非常重要的地位。因此，玉米的遗传转化一直受到极大的关注。CompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogoCompanyLogo消毒装置：分液漏斗中上加浓盐酸，下面为次氯酸钠；中间放置玉米种子瓶；烧杯内为氢氧化钠水溶液待瓶子充满氯气封口后在230r/min摇床上摇三小时，在无菌通风橱（通风橱