组织工程概述.pptVIP

种子细胞来源???种子细胞包括组织细胞和干细胞，组织细胞包括：（1）病人的自体细胞；最佳的细胞来源是病人的自体细胞，将其进行体外一定数量的扩增后用于组织工程研究。由于自体细胞具有体内移植后不引起免疫排斥反应等优点，因此受到研究人员的广泛青睐，是目前组织工程研究中应用最为广泛的一种细胞来源。尽管如此，自体细胞作为种子细胞来源也存在明显局限性，如自体细胞来源有限，在体外难以大量扩增，并且存在去分化现象等。（2）动物的异种细胞由于人体许多组织都缺乏自身细胞供应，科研人员希望将异种细胞作为种子细胞来源之一。美国Diacrin公司的科学家们开展了相关研究，希望获得一种“万能供体”细胞系，即通过去除或掩盖细胞表面识别“异体”细胞的蛋白质，以克服免疫排斥反应问题。目前该项研究已经有了初步研究成果。但由于异种细胞进行体内移植也存在明显限制，如容易引起病原体体内传播、免疫排斥等，因此大大降低了研究人员开展相关研究的积极性。体外培养成纤维细胞干细胞人胚胎干细胞和组织干细胞的研究进展为从根本上解决制约组织工程的细胞问题提供了可能。到目前为止,将胚胎干细胞分化而来的定向细胞用于治疗的实验已有报道,如将由胚胎干细胞衍化而来的少突神经胶质细胞移植到骨髓鞘缺陷型(ｍｙｅｌｉｎ-ｄｅｆｉｃｉｅｎｔＭＤ)大鼠胚胎的大脑脑室中,这些细胞会广泛分布,并形成髓鞘环绕在宿主的神经轴突周围。髓鞘缺陷型大鼠是人类遗传性髓鞘疾病的模型,进一步的工作便将衍化胶质细胞移植至动物模型的骨髓,发现髓鞘生长良好。这些实验都为将来人类疾病的攻克奠定基础。干细胞按来源来分：（1）胚胎干细胞（embryonicstemcells，ES）胚胎干细胞的分化和增殖构成动物发育的基础，即由单个受精卵发育成为具有各种组织器官的个体；（2）成体干细胞（Adultstemcells）成体干细胞的进一步分化是成年动物体内组织和器官修复再生的基础。种子细胞的分离和培养为支架材料提供生命源泉、并能形成组织的功能细胞称为种子细胞。依据其来源可分为自体、同种异体和异种细胞。自体细胞可由活检或穿刺所得到的组织进行分离培养,获得所需要的功能细胞;同种异体细胞主要来自胚胎、新生儿和成体组织;异种细胞主要来自于猪、牛等动物。其中干细胞研究最为突出。01种子细胞的作用02无菌条件下切取关节软骨;用300目滤网过滤收获软骨细胞,经细胞计数(台盼蓝染色细胞活度90%);置37℃、5%ＣＯ2培养箱内孵育至细胞形成单层；加入0.05%透明质酸酶溶液、0.20%胰蛋白酶溶液及0.20%Ⅱ型胶原酶溶液消化;接种于常规原代细胞培养液(ＨａｍｓＦ12+ＤＭＥＭ+10%胎牛血清+0.1%青、链霉素)中；12345以软骨细胞为例：种子细胞的获取以(2～3)×104ｃｍ2接种于含常规传代01细胞培养液(ＤＭＥＭ+10%胎牛血清02+0.1%青、链霉素)置37℃、5%ＣＯ203培养箱内孵育扩增细胞。04种子细胞永生化人体内获取的种子细胞来源有限;并且细胞增殖能力低,代谢缓慢,体外培养对密度高度依赖,且为有限增殖,传代到第9代左右,细胞出现老化现象,使传代难以为继，都是种子细胞库建立及组织工程必须解决的难题。0102永生化的定义及意义01所谓“永生化”(immortalization),就是指细胞处于连续的细胞周期而终止其发育进程,通俗一点说就是“使细胞获得了无限的增殖能力”02外研究种子细胞的分化与生长及增殖之间的关系；永生化的种子细胞可以作为种子细胞工程的细胞库或基因治疗的靶细胞；可以作为药理或毒理研究的标准细胞；组织工程提供足够量的种子细胞。建立永生化细胞的优势细胞永生化的方法01把编码癌蛋白的外源性遗传信息如ｍyc、neu、腺病毒Ｅ1Ａ、人类乳头瘤病毒Ｅ7片段等转入靶细胞,它们使生长抑制基因Ｒｂ和(或)ｐ53功能失活,突破细胞周期抑制关卡，从而使靶细胞在细胞周期中循环增殖而达到永生化。02ＳＶ40由病毒介导的hTERT的表达激活了正常细胞端粒酶的表达,进而导致端粒ＤＮＡ的增长和细胞生命周期的延伸；（3）端粒酶1996年,Razmik等从高剂量原子弹辐射后的幸存者身上得到了自发永生化的皮肤成纤维细胞。Ｘ射线、电离辐射、60Ｃｏ等放射性因素可以进行细胞永生化（4）放射性因素组织工程一、组织工程研究概况二、种子细胞三、支架材料四、生长因子五、组织工程的临床应用组织工程组织工程一词最早是在1987年美国科学基金会(ＮＳＦ)在华盛顿举办的生物工程小组会上提出。1988年,ＮＳＦ的一个专门工