细胞实验一 PEG介导细胞融合.pdf

细胞生物学实验

实验三：聚乙二醇PEG）介导的细胞融合

摘要

细胞融合(cellfusion)是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合

形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝

分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。

诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离

心，震动，电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋

白（fusionprotein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可

用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作

用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。

关键词

细胞融合；人工诱导；PEG

前言

人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种

细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学

研究的各个领域。基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不

同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。

细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有

萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另一个重要应用就是制备单克

隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速

等优点。因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。

这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。

一．目的要求

掌握细胞融合原理以及应用PEG诱导细胞融合的方法。

二．实验原理

两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。在通常情况下，两个细胞接

触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜

发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，

形成一个大的融合细胞。

细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而

且也能诱导动植物细胞间产生融合。细胞融合(Cellfusion)，即在自然条件下或用人工方法(生

物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞

融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合。

诱导细胞融合的主要方法有：病毒诱导融合，化学融合剂诱导融合和电融合。

1.病毒诱导融合：有许多种类的病毒能介导细胞融合，最常用的是灭活的仙台病毒（HVJ），

为RNA病毒。病毒诱导细胞融合的过程有：首先是细胞表面吸附许多病毒粒子，接着细胞发生

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细胞生物学实验

凝集，几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失，而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜

融合，胞浆相互交流，最后形成融合细胞。

2.化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶

性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于细胞融合

至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而

使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。

3.电融合：是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、

短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。

所有的细胞融合方法都有其各自的优缺点，我们在本次实验中采用PEG诱导细胞融合的方

法。

三．实验材料

1．材料：鸡血红细胞

2．器材和仪器：显微镜、离心机、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片

3．试剂：Alsever液(pH7.4)、0.85％生理盐水、GKN液、50％PEG

四．实验步骤

1.取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃下保存）。

2.取上步中所得悬液1ml+4ml0.85％的NaCl溶液，进以下