DB21T 2592.3-2016 鸡传染性疾病检测方法 第3部分：鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法　　.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2592.3—2016

鸡传染性疾病检测方法

第3部分：鸡马立克氏病毒实时荧光PCR

检测方法

Detectionmethodofchickeninfectiousdisease

Part3:Thetestingmethodofreal-timefluorescentPCRforchickenMareksdisease

2016-03-18发布2016-05-18实施

辽宁省质量技术监督局发布

I

DB21/T2592.3—2016

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3缩略语 1

4仪器与器材 1

4.1仪器 1

4.2器材 1

5试剂和材料 2

6操作步骤 2

6.1样品的采集、存放和运送 2

6.1.1采样工具 2

6.1.2样品的采集 2

6.1.3存放与运送 2

6.2实时荧光PCR检测 3

6.2.1DNA提取 3

6.2.2扩增体系的配制 3

6.2.3加样 3

6.2.4荧光PCR扩增检测 3

7结果判定 3

7.1阈值设定 3

7.2质控标准 4

7.3结果描述及判定 4

附录A（规范性附录）磷酸盐缓冲生理盐水配方 5

II

DB21/T2592.3—2016

前言

标准《鸡传染性疾病检测方法》按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。标准《鸡传染性疾病检测方法》分为三个部分：

——鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法——鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测方法

——鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法

本部分为标准《鸡传染性疾病检测方法》的第3部分本部分由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本部分由辽宁省畜牧兽医局归口。

本部分起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本部分主要起草人：王宏燕、曹东、闫海滨、石霖、赵培、何欣、薛树山、齐德林、李井春、马建山、姚伟、孙洪志

1

DB21/T2592.3—2016

鸡传染性疾病检测方法

第3部分：鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了鸡马立克氏病毒（Mareksdiseasevirus，MDV）实时荧光PCR检测方法的实验技术要求。

本标准适用于鸡马立克氏病毒的检测和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

MDV：鸡马立克氏病毒（Mareksdiseasevirus）Ct值：循环阈值（cyclethreshold）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

实时荧光PCR：实时荧光聚合酶链式反应（real-timefluorescentpolymerasechainreaction）PBS：磷酸盐缓冲生理盐水（phosphatebuffersaline）

4仪器与器材

4.1仪器

4.1.1分析天平

4.1.2高速离心机

4.1.3荧光PCR扩增仪

4.1.4冰箱（4℃,-20℃,-70℃)

4.1.5水浴锅

4.1.6微量移液器（最大量程为2μL，20μL，200μL，1000μL）

4.2器材

4.2.1组织匀浆器或研钵

4.2.2眼科剪

4.2.3眼科镊

4.2.4刀片

4.2.51.5mL灭菌离心管

4.2.6PCR八联排管或96孔板

2

DB21/T2592.3—2016

4.2.7吸头（10μL，200μL，1000μL）

4.2.8灭菌双蒸水

4.2.9称量纸

5试剂和材料

除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯。

5.1DNAzol?Reagent：DNA抽提试剂，外观为淡绿色，于4℃~8℃保存。

5.2SYBR?Gr