DB21T 2592.2-2016 鸡传染性疾病检测方法 第2部分：鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR 诊断技术　　.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2592.2—2016

鸡传染性疾病检测方法

第2部分：鸡传染性支气管炎病毒荧光

RT-PCR诊断技术

Detectionmethodofchickeninfectiousdisease

Part2：DiagnostictechniqueoffluorescentRT-PCRforavianinfectiousbronchitis

virus

2016-03-18发布2016-05-18实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2592.2-2016

目次

前言 2

1范围 3

2规范性引用文件 3

3缩略语 3

4仪器与器材 3

5试剂与材料 4

6操作步骤 4

6.1样品的采集、保存和制备 4

6.1.1采样工具 4

6.1.2样品的采集 4

6.1.3样品的保存 4

6.1.4样品的制备 5

6.2核酸的提取 5

6.2.1编号 5

6.2.2裂解 5

6.2.3沉淀 5

6.2.4洗涤 5

6.2.5干燥 5

6.2.6溶解 5

6.3RT-PCR检测 5

6.3.1反转录反应体系 5

6.3.2PCR反应体系 6

6.3.3检测条件设置 6

6.4结果判定 6

6.4.1结果分析条件设定 6

6.4.2质控标准 6

6.4.3结果描述及判定 7

附录A（资料性附录）磷酸盐缓冲生理盐水配方 8

附录B（规范性附录）生物安全注意事项 9

DB21/T2592.2-2016

前言

标准《鸡传染性疾病检测方法》按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。标准《鸡传染性疾病检测方法》分为三个部分：

——鸡传染性法氏囊病毒荧光RT-PCR检测方法；——鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断技术——鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法

本部分为标准《鸡传染性疾病检测方法》的第2部分本部分由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本部分由辽宁省畜牧兽医局归口。

本部分起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本部分主要起草人：吴运谱、赵晓彤、薛树山、魏园园、石霖、李红魁、王宏燕、闫海滨、李井春、孙世宇、孙洪志、梁伟

DB21/T2592.2-2016

鸡传染性疾病检测方法

第2部分：鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断技术

1范围

本部分规定了鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断所用的引物、反应程序、判断标准等技术要求。本部分适用于禽类及其产品中鸡传染性支气管炎病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

IBV：鸡传染性支气管炎病毒（avianinfectiousbronchitisvirus）DEPC：焦炭酸二乙酯（diethypyrocarbonate）

PBS：磷酸盐缓冲生理盐水（phosphatebuffersaline）RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数（Cyclethreshold）

4仪器与器材

4.1荧光PCR扩增仪

4.2高速台式冷冻离心机（最大离心力12000g以上）

4.3冰箱（2℃~8℃,-20℃和-70℃三种）

4.4分析天平

4.5组织样品研磨器

4.6医用剪刀

4.7镊子

4.8