任务单元抗原抗体的制备课件.ppt

任务六抗原抗体的制备;主要内容;学习目标;单元一抗原的制备;一、颗粒性抗原的制备;采集静脉血;(二)细菌抗原的制备;1.制备方法;2.细菌抗原的检定;二、可溶性抗原的制备;二、可溶性抗原的制备;〔一〕材料的选取与预处理;二、细胞裂解;;;2.超声波破碎法;3.酶处理法;4.反复冻融法;5.外表活性剂处理法;;〔三〕可溶性抗原纯化;〔1〕超速离心法;〔2〕选择性沉淀法;〔3〕凝胶过滤法;〔4〕离子交换层析法;〔5〕亲和层析法;2.核酸抗原的制备;核酸的保存

〔1〕温度

-70℃长期保存

-20℃

4℃〔5℃〕最正确和最简单

〔2〕介质

TE缓冲液〔最常用〕;3.脂多糖抗原的制备;4.Ig片段的制备;;〔3〕酶解法

酶解法的专一性极好，不同的片段可用不同的酶进行裂解。如木瓜酶水解IgG可获得1个Fc段和2个Fab段；胃蛋白酶水解IgG可获得F(ab)：和数个小片段。用木瓜酶水解得到的Fc段常作为抗原来制备抗重链血清，胃蛋白酶水解得到的F(ab)；常作为抗体试剂应用。;〔四〕纯化抗原的鉴定、浓缩与保存;三、半抗原的制备;2.多肽聚合物

人工合成的载体。常用多聚赖氨酸(polylysine)，其分子量高达lOOkD以上，是良好的载体。这种多肽聚合物与半抗原结合后，可诱导产生高效价、高亲合力的抗体。

3.大分子聚合物

羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose，CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidonc，PVP)等大分子聚合物均可与半抗原结合，参加弗氏完全佐剂可诱导动物产生良好的抗体。;〔二〕半抗原与载体的连接方法

1.物理法通过吸附作用。

2.化学法通过交联实现。

〔三〕半抗原的鉴定

1.目的：测定半抗原与载体的比例。

2.测定方法：

〔1〕吸收光谱分析法

〔2〕放射性核素标记半抗原掺入法;〔1〕如果半抗原有适宜的吸收光谱，测定在一定波长下复合抗原和载体之间克分子吸光度的差异，然后把这个差异与同样波长下半抗原的克分子吸光度数相比较，就可以准确地计算出所结合的半抗原分子数。

〔2〕在偶联反响液中参加一定量的放射性核素标记的半抗原，偶联反响后经充分透析，测量透析袋中的放射性含量，计算结合到载体上的半抗原分子数。;四、免疫佐剂;〔一〕佐剂的种类与制备;具备免疫原性的佐剂：如卡介苗、枯草分枝杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、脂多糖、细胞因子等。

不具备免疫原性的佐剂：如氢氧化铝佐剂、磷酸铝、磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、外表活性剂、藻酸钙、多聚核苷酸、胞壁肽等。

应用最多的是福氏佐剂、细胞因子佐剂。;〔1〕福氏佐剂：分完全福氏佐剂〔石蜡油+羊毛脂+卡介苗〕、不完全福氏佐剂〔石蜡油+羊毛脂〕两种。福氏完全佐剂可提高佐剂效能，但注射后易产生局部持久性溃疡和肉芽肿，宜注意。

〔2〕细胞因子佐剂：细胞因子佐剂与抗原合用，可有效激发机体的免疫功能。IL-2、IL-1、IFNγ、IL-12、GM-CSF皆较常应用；细胞因子佐剂还被广泛应用于肿瘤基因治疗中。;用于人体的佐剂：氢氧化铝、明矾、polyI∶C、胞壁酰二肽、细胞因子、热休克蛋白

常用于动物实验的佐剂：弗氏佐剂(Freund’sadjuvant)。

;2.制备

;制备方法

〔1〕研磨法

〔2〕搅拌混合法〔注射器混合法〕

〔3〕其他方法超声;〔二〕佐剂的作用机制;〔三〕佐剂的应用原那么;小结;