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MIS18BP1在膀胱癌中的表达、作用机制及临床意义研究

摘要

研究目的：

膀胱癌（Bladdercancer,BLCA）是目前最常见的泌尿系统肿瘤之一，具有高发病

率和高复发率等特点。众所周知，有丝分裂作为细胞分裂增殖的重要方式，对真核生物

生长发育及遗传具有重要意义，其调控失调与肿瘤的发生与发展关系密切。研究发现，

由MIS18α，MIS18β和MIS18结合蛋白1（MIS18bindingprotein1,MIS18BP1）组成

的MIS18复合物是参与细胞有丝分裂的重要分子复合体；MIS18BP1作为关键一员，

其N端490个氨基酸片段在G1期促进着丝粒蛋白A(CentromereproteinA，CENP-A)

的组装，但其调控肿瘤的作用机制尚未完全阐明。故本研究旨在利用生物信息学数据

库分析MIS18BP1在膀胱癌组织中的表达变化及其表达与膀胱癌患者临床病理特征和

预后的关系，同时探索MIS18BP1mRNA在膀胱癌患者外周血单个核细胞中的表达水

平；免疫组织化学法探究MIS18BP1蛋白在膀胱癌组织和相应癌旁组织的表达以及对

膀胱癌T24细胞株的增殖、侵袭和迁移能力的影响，深入探究MIS18BP1调控膀胱癌

发生的具体机制，以期寻找到膀胱癌的新型治疗靶点。

研究方法：

（1）使用“limma”包对GEO和TCGA数据库中BLCA队列的mRNASeq数据进

行差异基因筛选，分析MIS18BP1在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达，通过

UALCAN数据库探索MIS18BP1的表达与患者临床病理特征的关系并探究其表达与免

疫细胞浸润程度的相关性，使用DAVID在线数据库进行GO和KEGG分析探究

MIS18BP1可能参与的生物学功能；GSEA分析寻找与MIS18BP1密切相关的基因参

与的信号通路；（2）通过实时荧光定量PCR检测40例膀胱癌患者和60例健康人外周

血单个核细胞中MIS18BP1mRNA表达水平；（3）收集经膀胱癌根治性切除术患者的

癌组织和癌旁组织，免疫组织化学法探究MIS18BP1的蛋白表达水平，并分析其表达

与膀胱癌患者临床病理参数的关系；（4）购买LV-MIS18BP1-RNAi慢病毒感染膀胱癌

T24细胞株并筛选获得下调MIS18BP1表达的稳转细胞系，通过PCR、蛋白质免疫印

迹（Western-Blot）检测MIS18BP1的表达情况，采用克隆形成实验、CCK-8细胞增殖

实验、Trans-well迁移实验以及划痕实验分别检测MIS18BP1下调对T24细胞生存、增

殖及迁移能力的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；通过TCGA数据库寻找到差

异表达基因功能蛋白富集的信号通路，采用Western-Blot检测下调MIS18BP1表达的

膀胱癌细胞中P53及细胞凋亡相关蛋白（BAX、Caspase3）、抗凋亡蛋白BCL2的表达

变化，采取补救实验探究P53抑制剂（PFTα）对下调MIS18BP1的膀胱癌细胞的生物

学行为影响，从而阐述MIS18BP1调控膀胱癌发生发展的具体机制。

研究结果：

（1）生物信息学分析表明，与正常膀胱组织相比，MIS18BP1mRNA在膀胱癌组

织中的表达增加；UALCAN数据库分析发现Stage2、Stage3、Stage4期的膀胱癌患者

MIS18BP1mRNA表达水平明显升高；N0、N1、N2期膀胱癌患者MIS18BP1mRNA表

达水平明显升高。基因富集分析发现与MIS18BP1密切相关的基因主要参与生物过程

中的细胞周期、染色体分离和DNA修复。在细胞成分方面，这些基因主要富集在细胞

质、染色体中心粒区域。在分子功能方面，这些基因主要参与调节ATPase活性、微管

活性和微管结合。在KEGG通路中，这些共表达基因主要调控核胞质转运、剪接体形

成和细胞周期等方面。（2）qRT-PCR结果显示与健康对照组相比，MIS18BP1mRNA在

膀胱癌患者外周血单个核细胞中的表达显著增加；（3）免疫组化表明膀胱癌MIS18BP1

蛋白阳性率显著增高，且阳性表达率与肿瘤临床分期、浸润深度及淋巴结转移相关；

（4）慢病毒LV-MIS18BP1-RNAi感染膀胱癌细