PD-L1抗体通过诱导IL-17A分泌促进肝癌免疫治疗耐受的机制研究.pdfVIP

PD-L1抗体通过诱导IL-17A分泌促进肝癌免疫治疗耐受的机制研究

摘要

1PD-L1PD-

目的程序性细胞死亡配体（）是重要的免疫抑制配体，肿瘤细胞表面

L1与淋巴细胞表面的PD-1分子结合，可以抑制淋巴细胞的活化，削弱机体的抗肿

PD-L1T

瘤免疫应答。因此，抗抗体可以通过阻断细胞激活过程中的共抑制性信

号释放患者自身的抗肿瘤免疫应答能力。然而，该药物在肝癌治疗中的三期临床

实验以失败告终。近年来有研究表明抗PD-1抗体治疗可显著增加肺癌中Th17细

胞的浸润和激活。本课题旨在探讨抗PD-L1抗体治疗肝癌产生耐药性的机制，验

证IL-17A中和抗体联合抗PD-L1抗体治疗肝癌的效果并分析肿瘤免疫微环境的变

化，从而为肝癌临床治疗提供新的理论依据。

H22Huh-717AαIL-17A

方法本研究使用和两种细胞系来探究白介素中和抗体（）

联合抗PD-L1抗体（αPD-L1）治疗对H22细胞荷瘤小鼠的影响。按照以下实验步

1H22

骤进行：、荷瘤小鼠肝癌皮下瘤模型的治疗和处理：建立小鼠肝癌皮下瘤模

3

型，待瘤体体积达到50-100mm后进行分组，抗PD-L1抗体治疗每三天一次腹腔

200μgIL-17A200μgCClCCL

注射，抗抗体治疗每周一次腹腔注射，混合液（：

44

橄榄油1：4）每周两次瘤周注射2mL/kg。每隔两天用游标卡尺测量肿瘤体积

21/223

（体积长×宽×），称量小鼠重量。天后剥离肿瘤组织，测量瘤体体

积，称量瘤体重量，拍照。2、H22荷瘤小鼠肝癌原位瘤模型的治疗和处理：建立

2mL/kgCClCCL1

小鼠肝癌原位瘤模型，每周两次腹腔注射混合液（：橄榄油：

44

4），第8天开始每三天一次腹腔注射200μg抗PD-L1抗体治疗，每周一次腹腔注

200μgIL-17A23

射中和抗体治疗。天后处死小鼠，切除肿瘤，测量体积，称重，

拍照，做流式并进行石蜡包埋。进行生存分析的组别每天观察并记录小鼠生存情

3PD-L1

况及状态。、肝纤维化小鼠模型治疗和处理：构建小鼠肝纤维化模型，抗

抗体治疗每三天一次腹腔注射200μg，4周后取小鼠肝脏组织拍照、称重并进行石

4

蜡包埋。、肝纤维化程度检测：天狼星红染色检测小鼠肿瘤组织及肝脏组织的纤

维化程度，免疫组织化学染色检测小鼠肿瘤组织及肝脏组织中α-SMA的表达。5、

Th17pTh17

致病性细胞（细胞）浸润分析：流式细胞术检测肿瘤组织和肝脏组织

+

中CD4T细胞、Th17细胞和pTh17细胞频率，qPCR、免疫组织化学染色和