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分子的活化与去活化S0S1T1S2紫外可见吸收光谱外转移紫外可见共振荧光光谱内转移荧光系间窜跃磷光反系间窜跃迟滞荧光振动弛豫２.无辐射跃迁的类型振动弛豫:Vr10-12sec外转移:无辐射跃迁回到基态内转移:S2~S1能级之间有重叠系间窜跃:S2~T1能级之间有重叠反系间窜跃:由外部获取能量后T1~S2１.辐射跃迁的类型共振荧光：10-12sec荧光：10-8sec磷光：1~10-4sec迟滞荧光:102~10-4sec二.荧光的发光类型E0E1E2AAFF起源于基态的共振荧光热助共振荧光1.共振荧光发射与吸收线波长相同的荧光E0E1E2E3AAFF起源于基态的直跃线荧光起源于亚稳态的直跃线荧光E0E1E2E3AAFF正常的阶跃线荧光热助阶跃线荧光E0E1E2E3AAFF起源于亚稳态阶跃激发荧光起源基态阶跃激发荧光2.非共振荧光荧光的波长与激发光不同时Stores荧光:直跃线荧光、阶跃线荧光Anti-stores荧光：阶跃激发荧光三、主要组成及部件的功能荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图光源氙灯激发单色器样品池光电倍增管数据处理仪器控制光源样品池激发单色器检测器数据处理仪器控制发射单色器发射单色器消除散射光和入射光的干扰日本岛津?RF-531PC11万荧光分光光度计的类型历程：手控式荧光分光光度计、自动记录式荧光分光光度计和计算机控制式荧光分光光度计。类型：单光束、双光束荧光分光光度计、低温激光Shpol’skill荧光分光光度计、配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。主要产品：天津港东生产的F-380型、F-320型、F-280型；天津拓普生产的WFY-28型荧光分光光度计；上海精密生产的970CRT型荧光分光光度计；上海棱光生产的F96型荧光分光光度计等日本岛津?RF-531PC11万日立F-450021.2万原子荧光?PF6-39.9万仪器光路图该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析；1.无机化合物四.荧光分析的应用在紫外光照射下会发生荧光的无机化合物很少，主要依赖于有机试剂形成的螯合物。直接荧光测定法其中，较常测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到10-10;某些元素虽然不与有机试剂形成发荧光的配合物，但是它会与发荧光的配合物争夺配位体，组成不发荧光的配合，使其产生荧光熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。较常测定的元素有：F、S、Fe、Ag、Co、Ni、Cu、Mo、W荧光熄灭测定法铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定；铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定；铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定２.有机化合物芳香族化合物存在共轭的不饱和体系，是有机化合物荧光测定的主要类型。待测物试剂λexmaxλemmax测定范围ppm丙三醇苯胺紫外蓝色0.1~2糠醛蒽酮4655051.5~15氨基酸氧化酶3154250.01~50维生素A无水乙醇3454900~20蛋白质曙红丫紫外5400.06~6肾上腺素乙二胺4205250.001~0.02青霉素α-甲氧基-６-氯-９-(β-氨乙基)-氨基氮杂蒽4205000.0625~0.625玻璃酸梅3-乙酰氧基吲哚3954700.001~0.033胍基丁胺邻苯二醛3654700.05~5四氧嘧啶苯二胺36548510-4生物化学及生理医学方面的应用因荧光法有很高的灵敏度和较好的特效性，在生物化学及生理医学方面有重要应用。例：用荧光法研究氨基酸和蛋白质。虽然游离氨基酸中能产生荧光的只有几个带苯环的氨基酸如色氨酸、酪氨酸和苯基丙氨酸，然而，某些蛋白质含有荧光辅酶(Fluorescentcoenzyme)，荧光辅酶生色剂可用于许多蛋白质的荧分析中。例：镇静剂利血平具有荧光，它还可氧化成具有更强烈荧光的产物再进行分析。紫外-可见分光光度计:检测器数据处理仪器控制数据处理仪器控制光源单色器样品池检测器荧光分光光度计:光源激发单色器发射单色器样品池紫外-可见分光光度计

测量池(吸收池)荧光分光光度计样品池I0ItI0ItI