细菌检验技术全解.pptVIP

B-半乳糖苷酶试验应用：迟缓发酵乳糖细菌的快速检测结果：加入ONPG后，菌悬液黄色：+菌悬液无色：-培养基：1%乳糖肉汤琼脂原理：有些细菌产生的B-半乳糖苷酶可分解邻硝基酚B-半乳糖苷（ONPG）产生邻硝基苯酚（黄色）试剂：甲苯、ONPGFe2+原理：某些细菌可以分解七叶苷七叶苷水解试验01培养基：七叶苷培养基结果：培养基黑色：+培养基不变色：-应用：D群链球菌和其他链球菌的鉴别七叶苷葡萄糖+七叶素黑色沉淀02靛基质试验硫化氢试验尿素酶试验苯丙氨酸脱氨试验氨基酸脱羧酶试验二、蛋白质类代谢试验原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。培养基：蛋白胨水试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+培养基液面为黄色：－应用：用于肠道杆菌的鉴定（一）靛基质试验AEDBC色氨酸靛基质（吲哚）对二甲基氨基苯甲醛玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）色氨酸酶靛基质试验原理二氧化碳培养箱电热恒温培养箱厌氧培养箱培养箱培养基培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。培养基的成分及作用营养物质：肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐水凝固剂：琼脂、明胶抑制剂指示剂培养基的种类按培养基的物理性状分类液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。1基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板2营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板3鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）6厌氧培养基：用于培养厌氧菌5增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。4选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板按培养基的用途分类3、培养基制备的一般程序调配溶化矫正pH过滤澄清分装灭菌检定培养基灭菌★基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟★含糖培养基：113℃灭菌15分钟★鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次★不耐高温的液体成分：滤过除菌保存二、细菌接种与培养技术（一）无菌技术1、细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。2、无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。3、细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌4、无菌试管、烧瓶、吸管的使用5、标本的采集6、废弃物的处理8、个人防护（二）细菌接种与分离技术

1、细菌接种的基本程序沾取标本接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境细菌接种法平板划线接种法：目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。方法：分区划线法：适用于含菌量较多的标本连续划线法：适用于含菌量较少的标本第一区划线01灭菌接种环02第二区划线03灭菌接种环04第三区划线05灭菌接种环06分区划线法连续划线法2018液体培养基接种法012019穿刺接种法:用于观察细菌动力022020斜面接种法032021倾注培养法:用于细菌计数042022涂布接种法：见于药敏试验05细菌的培养方法一般培养（需氧培养）：培养温度：35℃（采用恒温培养箱）培养时间：18～24h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱、化学法厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌的生长现象细菌在液体培养基中的生长现象混浊沉淀：多见于链状排列的细菌菌膜：多见于厌氧菌细菌在液体培养基中的生长现象细菌在半固体培养基中的生长现象01有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。02细菌在半固体培养基中的生长现象无动力现象有动力现象（三）细菌在固体培养基中的生长现象菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落菌落与菌苔第三节细菌生化鉴定技术细菌的生化反应：细菌具有各自独特的酶系统，因而在代谢过程